止痛化癥分散片質量標準研究分析

止痛化癥分散片質量標準研究分析

　　【摘要】：目的 建立止痛化癥分散片的質量標準。方法 采用薄層色譜法對止痛化癥分散片中的延胡索、黃芪、川楝子進行了鑒別研究;同時采用HPLC法測定止痛化癥分散片丹參中丹參素的含量。結果 定性鑒別分離度好，專屬性強;以HPLC法測定止痛化癥分散片丹參中丹參素的含量，方法精密度、穩定性、重現性良好，平均回收率為99.66%， RSD=1.60%(n=9)。結論 本試驗所確定的質量分析方法穩定可靠，可作為止痛化癥分散片的質量控制標準。

　　【關鍵詞】止痛化癥分散片　丹參素　薄層色譜法　高效液相色譜法

　　Abstract：Objective To establish the quality standard for Zhitong Huazheng Dispersed Tablets. Methods Rhizoma corydalis， Radix astragali， Fructus toosendan in Zhitong Huazheng Dispersed Tablets were identified by TLC. The content of Danshensu was determined by HPLC. Results The spots on the TLC could be well separated and the method had strong specificity. The method for determinating the content of Dispersed tablets by HPLC was suitable for the quality standard with sufficient accuracy， stability and reappearance. The average recovery of Danshensu was 99.61%， RSD=1.60% (n=9). Conclusion The qualitative and quantitative analytic methods are stable and reliable. It can be used for quality control of Zhitong Huazheng Dispersed Tablets.

　　Key words：Zhitong Huazheng Dispersed Tablets;Danshensu;TLC;HPLC

　　止痛化癥分散片是在止痛化癥膠囊[1]的基礎上，通過改變劑型制得的分散片。本制劑由黨參、黃芪(炙)、白術、丹參、當歸、雞血藤、三棱等19味中藥經提取加工制成。為保證臨床用藥安全有效，嚴格控制本品的質量，我們參考文獻[2-3]，采用薄層色譜法對延胡索、黃芪、川楝子進行了定性鑒別，應用HPLC法測定丹參中丹參素的含量。

　　1、儀器與藥品

　　高效液相色譜儀(UV200 Ⅱ，大連依利特科學儀器有限公司);電子天平(AL204，梅特勒-托利多上海稱重設備公司);硅膠G薄層板(自制，硅膠G由青島海洋化工有限公司制造，為化學純)。丹參素鈉對照品(批號855-200202，為含量測定用)、黃芪甲苷對照品、延胡索乙素對照品、川楝子對照藥材由中國藥品生物制品檢定所提供;陰性樣品(按處方藥味去除被測成分，其余藥味按制劑的制備工藝制得)。含量測定所用的甲醇為色譜純，其它所用試劑均為分析純。

　　2、定性分析

　　2.1 黃芪的薄層色譜鑒別

　　取本品20片，研細，取9 g，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液;加氨試液3倍量，搖勻，放置分層，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗[1]，吸取供試品溶液5 μg、對照品溶液2 μg，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

　　2.2 延胡索的薄層色譜鑒別

　　取本品15片，研細，取6 g，加濃氨試液3 mL及三氯甲烷40 mL，搖勻，放置1 h，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品，加甲醇溶解，制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗[1]，吸取上述兩種溶液各2～3 μL，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5∶4∶1)為展開劑，置預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑點清晰，取出，在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

　　2.3 川楝子的薄層色譜鑒別

　　取本品20片，研細，取10 g，加乙醇30 mL超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取川楝子對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗[1]，吸取上述2種溶液各4 μL，分別點于同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

　　3、定量分析

　　3.1 對照品溶液的制備

　　取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含0.3 mg的溶液(相當于每1 mL含丹參素0.27 mg)，即得。

　　3.2 供試品溶液的制備

　　取本品20片，研細，精密稱取約10 g，精密加入1%鹽酸-甲醇溶液(50∶50)50 mL，稱定重量，超聲處理(功率200 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，稱定重量，用上述鹽酸-甲醇溶液補足減失的重量，過0.45 μm濾膜，即得。

　　3.3 陰性液的制備

　　取除去丹參以外的其它藥材，按供試品溶液制備方法制成陰性液。

　　3.4 色譜條件與系統適用性試驗

　　色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫為室溫。流動相：甲醇-水-二甲基甲酰胺-冰醋酸(2∶95∶2∶1)，流速1.0 mL/min。檢測波長：281 nm。理論塔板數按丹參素峰計算不低于6 000。在選定的色譜條件下，供試溶液中丹參素與相鄰組分分離度良好，陰性液無干擾(見圖1)。

　　3.5 線性關系

　　精密稱取丹參素鈉(以丹參素計)對照品30 mg，置10 mL量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取上述溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標進行回歸，得回歸方程Y=289.29X+648.26，r=0.999 8。結果表明，丹參素進樣量在3.6～8.4 μg范圍內線性關系良好。

　　3.6 最低檢測限

　　取線性關系試驗項下的3號溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，再精密量取20 μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，按3倍信噪比S/N計，最低檢測限為100 ng。

　　3.7 定量限

　　取線性關系試驗項下的3號溶液3 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μL，注入液相色譜儀， 記錄色譜圖。色譜圖中，信噪比約為10∶1，計算定量限約為300 ng。

　　3.8 穩定性試驗

　　精密吸取供試品溶液20 μL，每隔2 h進樣測定1次，共測定8 h，結果表明，RSD=2.1%，表明供試品溶液在8 h內基本穩定。

　　3.9 精密度試驗

　　精密吸取對照品溶液20 μL，連續進樣5次，結果其峰面積的RSD=1.28%，表明儀器有很好的精密度。

　　3.10 重現性試驗

　　照“3.2”項下制備6份供試品溶液，分別精密吸取20 μL，按前述色譜條件進樣分析，測定色譜峰面積，結果RSD=1.12%，表明本法重現性良好。

　　3.11 回收率試驗

　　采用加樣回收法。精密稱取已知丹參素含量的供試品藥粉，按“3.2”項下方法制備供試品溶液，再添加一定量的丹參素鈉對照品溶液，按上述色譜條件測定。結果平均回收率為99.66%， RSD=1.60%。見表1。表1 加樣回收試驗測定結果(略)

　　3.12 樣品測定

　　為制定含量限度，制備供試品3批(20060310、20060311、20060312)。按上述測定方法，測定其中丹參素的含量，結果見表2。表2 丹參素含量測定結果(略)

　　根據上述測定結果，并參照止痛化癥膠囊[2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)][1]，本品每片含丹參以丹參素(C15H24N2O)計，不得少于0.2 mg。

　　4、討論

　　本試驗采用TLC法對方中當歸的鑒別方法加以篩選研究，但陰性對照有干擾，無法確立重復性、專屬性良好的分析方法，其鑒別方法有待于進一步研究。在選定色譜條件下，本試驗以HPLC法測定臣藥當歸中阿魏酸的含量，供試溶液中阿魏酸與相鄰組分分離度良好，陰性液無干擾。但在方法學考察中，回收率低于新藥申報的要求，約在85%～90%之間，還有待于進一步研究。

　　2005年版《中華人民共和國藥典》規定了丹參中丹參酮ⅡA的含量測定方法與限度，經查閱有關文獻，丹參中所含水溶性成分如丹參素、原兒茶醛相對丹參酮ⅡA穩定，近幾年文獻報道均為測定復方制劑中(丹參)丹參素含量，且丹參中水溶性成分丹參素為活血的有效成分之一，故本試驗擬用HPLC法測定君藥丹參中丹參素的含量。在選定的色譜條件下，供試溶液中丹參素與相鄰組分分離度良好，陰性液無干擾。經方法學考察，方法的重復性、穩定性、精密度、回收率試驗均符合有關規定。因此，確立本制劑定量指標為丹參素，定量方法為HPLC法。試驗中對提取溶劑、超聲處理條件進行了考察，結果表明，選用1%鹽酸-甲醇(50∶50)為提取溶劑，超聲提取30 min，樣品中丹參素提取效率最佳。

　　【參考文獻】

　　[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社，2005.372，104，94，29.

　　[2] 丁水平，杜 光.高效液相色譜法測定婦血康膠囊中原兒茶酸的含量[J].中國醫院藥學雜志，2006，36(9)：1177-1179.

　　[3] 陳 斌，余岳林，張少敏，等.HPLC法測定止痛化癥膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸和丹酚酸B含量[J].藥學服務與研究，2007，7(1)：71-73.

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