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翻白草不同方法提取物對小鼠降血糖作用
翻白草(Potentilla discolor Bunge)為薔薇科委陵菜屬多年生草本植物，根部或干燥全草均可入。全國各地均有分布，為我國傳統〔1〕。近年來，民間流行用翻白草治療糖尿病并取得一定的療效。為了解翻白草降血糖作用機制，開發糖尿病新藥或品，本研究對翻白草進行提取，按極性不同的3個部分，利用四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠模型進行活性篩選，以確定具有較強降血糖活性的部分。1 與方法
1?1 實驗動物 昆明種小鼠(雄性)100只(昆明動物所)(合格證編號：滇實驗動物證第2002106號)。
1?2 主要試劑及儀器 四氧嘧啶(美國Sigma公司)；葡萄糖測定試劑盒(上海榮盛生物技術有限公司，批號20030101)：消渴丸(廣州中一藥業有限公司，批號：E01895)；722型光柵分光光度計(上海分析儀器總廠)。
1?3 方法
1?3?1 樣品提取并初步分離 利用乙醇浸提，乙酸乙酯萃取，D101大孔樹脂柱層析，將翻白草分為I～Ⅲ部分，分別對應D101大孔樹脂水洗脫部分、D101大孔樹脂甲醇洗脫部分、乙酸乙酯萃取物。
1?3?2 實驗動物糖尿病模型的建立〔2，3〕 實驗動物體重(26±2)g，禁食16h，準備給予四氧嘧啶造模。四氧嘧啶溶液臨用前配制，濃度為12mg／ml。給藥方式為腹腔注射，劑量120mg/(kg·bw)，一周后，于第8d斷食3h后，眼眶內眥采血，離心取上層血清在24h內用葡萄糖氧化酶法測定血糖。取血糖值>12mmol／L的糖尿病模型小鼠分組進行翻白草降血糖實驗。
1?3?3 實驗動物分組及處理 取血糖值>12mmol／L的糖尿病模型小鼠54只，正常小鼠10只作為對照組，共計64只，分為6組，分為糖尿病模型組(11只)、陽性對照組(10只)和3個實驗組(各11只)。正常對照組、糖尿病模型組給予蒸餾水，劑量為每天450mg／(kg·bw)；陽性對照組給予降血糖藥物消渴丸，劑量為3?75g(kg·bw)；3個實驗組I～Ⅲ分別給予D101大孔樹脂水洗脫物、D101大孔樹脂甲醇洗脫物、乙酸乙酯萃取物，劑量均為每天450mg/(kg·bw)。給藥方式為灌胃，每天1次，時間30d。30d后，測血糖值，條件和方法同前。30d內每周稱各組小鼠空腹體重，觀察體重變化。
1?3?4 分析 采用SPSS11?0統計軟件，進行方差分析及t。
2 結果
實驗組Ⅰ、Ⅱ與糖尿病模型組比較，血糖值降低差異無統計學意義(P>0?05)，表明對糖尿病小鼠降血糖作用不明顯。而消渴丸組與實驗組Ⅲ與糖尿病模型組比較，血糖降低差異有統計學意義(P<0?05)，表明實驗組Ⅲ即乙酸乙酯部分對糖尿病小鼠有降血糖作用，其降血糖效果與降糖藥物消渴丸類似。因此，可認為翻白草降血糖活性成分主要存在于乙酸乙酯部分，將該部分進一步研究，見表1。實驗期間，通過對動物體重的觀察可知，糖尿病模型組動物體重增長緩慢，其余各組動物體重均穩定增長，但各組之間比較差異無統計學意義(P>0?05)，可認為翻白草各部分對糖尿病小鼠的體重沒有影響。
表1 翻白草對糖尿病小鼠血糖水平的影響（略）
注：與糖尿病模型組比較，a P<0?05：與實驗前比較，c P<0?05；與糖尿病模型組比較，b P<0?01；與其余各組比較，d P<0?01
正常小鼠的血糖、體重與正常對照組比較差異無統計學意義(P>0?05)，可認為翻白草的乙酸乙酯部分對正常小鼠的體重、血糖均無影響。
3 討論
翻白草的根主要含鞣質及黃酮類化合物〔1〕。黃酮類化合物具有多種生理活性，也具有降血糖的活性，其降血糖機制是多方面的〔4，5〕。提示其降血糖活性成分可能是其中的黃酮類物質。本實驗結果表明，翻白草乙酸乙酯萃取物具有較強的降血糖作用，并且對正常小鼠的體重、血糖均無影響。其降血糖活性成分可能是其中的黃酮類物質，其降血糖作用機制有待進一步研究。而其余2個部分未顯示降血糖作用，原因可能是提取分離過程中一些成分發生損失，或在該劑量下未能顯示降血糖活性。
【參考文獻】
〔1〕 江蘇新院.中藥大詞典［M］.下冊.上海：科學技術出版社，1986：2705.
〔2〕 張均田.現代實驗方法［M］.上冊.北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1998：981-986.
〔3〕 鄭建仙.功能性食品［M］.3卷.北京：中國輕出版社，1999：484-489.
〔4〕 陳勇，張晴.五羥基黃酮的藥研究近況［J］.中草藥，1998，29(8)：569-570.
〔5〕 王瑋，王琳.黃酮類化合物的研究進展［J］.沈陽醫學院學報，2002,4(2)：115-119.
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