- 相關(guān)推薦
膀胱癌細(xì)胞凋亡與MDM2和P53基因表達(dá)的意義
作者：楊承綱，張麗娟，李梅，陳蕓【關(guān)鍵詞】 膀胱腫瘤；P53基因；MDM2基因；免疫組織化學(xué)；細(xì)胞凋亡
［摘 要］ 目的：研究膀胱癌細(xì)胞凋亡、MDM2、P53基因表達(dá)的意義。方法：采用免疫組織化學(xué)方法及TUNEL法檢測11例“正常膀胱黏膜”和83例膀胱移行細(xì)胞癌中MDM2、P53基因的表達(dá)及細(xì)胞凋亡指數(shù)。結(jié)果：P53陽性率為50.6%,MDM2陽性率為59.03%，AI=1.433 5±0.386 3。MDM2陽性表達(dá)與病理分級及臨床分期呈負(fù)相關(guān)(R=-0.263,P=0.016及R=-0.388,P=0.001);P53陽性表達(dá)與病理分級及臨床分期呈正相關(guān)(R=0.492,P=0.001；R=0.341，P＜0.01);MDM2、P53三種蛋白間表達(dá)無相關(guān)性；AI與MDM2呈負(fù)相關(guān)（R=-0.226,P=0.042）；AI與病理分級及臨床分期呈正相關(guān)(R=0.642,P=0.000；R=0.455，P=0.000)；AI與P53無相關(guān)性。AI、P53、MDM2的表達(dá)與5 a生存率有關(guān)。結(jié)論：聯(lián)合運(yùn)用臨床分期及病理分級并檢測P53、MDM2可用于判斷膀胱移行細(xì)胞癌的預(yù)后。
�。坳P(guān)鍵詞］ 膀胱腫瘤；P53基因；MDM2基因；免疫組織化學(xué)；細(xì)胞凋亡
Clinical Significance of Expression of MDM2 P53 Protein and Apoptosis in Bladdercancer
Abstract：Objective To investigate the expression of MDM2 Pgp protein and apoptosis and its significance in bladder cancers.Methods Apoptosis Index(AI) was assessed with TUNEL technique,and immunohistochemical stainings of MDM2 and Pgp were performed in 83 cases of the carcinomas and 11 “normal” bladder mncosa.Results The positive expression rate of P53 gene was 50.6% and MDM2 was 59.03%,and AI=1.433 5±0.386 3.The level of MDM2 was negative correlated with the tumor pathological grade and clinical stage(R=-0.263,P=0.016及R=-0.388,P=0.001);The level of P53 was positive correlated with the tumor pathological grade(R=0.492,P=0.001);No correlated was found between MDM2 and P53 gene;The level of AI was negative correlated with MDM2(R=-0.226,P=0.042);The level of AI was positive correlated with the tumor pathological grade and clinical stage (R=0.642,P=0.000；R=0.455，P=0.000);The level of AI was no correlated with P53.AI and the expression of P53 and MDM2 were related to 5year survival rate.Conclusion By exerting the tumor pathological grade and clinical stage and detecting P53 MDM2 genes expressions,the prognosis of bladder cancer can be decided.論文網(wǎng)在線
Key words：Bladder neoplasm；P53 gene；MDM2 gene；Immunohistochemistry；Apoptosis
MDM2基因是一原癌基因，與P53構(gòu)成降解反式激活循環(huán)通路，參與細(xì)胞生長抑制、凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控等過程。細(xì)胞凋亡是由基因調(diào)控的細(xì)胞主動死亡過程，同腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及臨床治療有密切的關(guān)系。本研究采用免疫組化方法觀測MDM2、P53基因在人膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)及用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡，探討它們在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及其對膀胱癌生物學(xué)行為和預(yù)后的影響。
1 材料與方法
1.1 材料 收集本院病理科1996年至2004年間膀胱移行細(xì)胞癌83例及11例正常膀胱黏膜組織，83例膀胱移行細(xì)胞癌中男性66例，女性17例，年齡35歲~82歲，平均年齡58.5歲。病理檢查前均未接受過放療和化療，術(shù)后均進(jìn)行化療藥物膀胱灌注。按1999年WHO病理組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ級29例，Ⅱ級31例，Ⅲ級23例；按UICC臨床分期，TisT1期61例，T2T4期22例。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。術(shù)后隨訪16個(gè)月~5 a，平均38個(gè)月，失訪5例，腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移56例，死亡2例，無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移20例。
1.2 方法
1.2.1 陰性、陽性檢測 MDM2、P53單抗均購自福州邁新公司。采用SP法進(jìn)性免疫組化染色，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。用已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。結(jié)果判定：MDM2、P53以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞＞10%為陽性結(jié)果，反之為陰性結(jié)果（見圖1，圖2）。
圖1 P53陽性表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒(SP×400)（略）
圖2 MDM2陽性表達(dá)于細(xì)胞核呈棕黃色顆粒（SP×400）（略）
1.2.2 凋亡個(gè)數(shù)檢測 細(xì)胞凋亡檢測（末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的xdUTP切口末端標(biāo)記，terminal deoxynucleotide transferase mediated dUTPnick end labeling method,TUNEI法）試劑盒，DAB顯色試劑盒購于福州邁新公司。步驟：切片脫蠟水化，3%H2O2清除內(nèi)源性過氧化酶10 min，蒸餾水洗滌2 min共洗3次；加TBS1∶100蛋白酶K，37 ℃消化10 min，蒸餾水洗滌2 min共洗3次；每片加TDT和DIGdUTP各1 μl，標(biāo)記緩沖液18 μl，4 ℃冰箱過夜，TBS洗2 min共洗3次；加封閉液50 μl，室溫30 min；封閉液1∶100生物素化地高辛抗體50 μl，37 ℃反應(yīng)30 min；TBS洗2 min共洗3次；加TBS1∶100稀釋SABC，37 ℃反應(yīng)30 min；TBS洗5 min共洗4次；DAB顯色，蘇木素襯染，脫水、透明、封片。實(shí)驗(yàn)中以不含TDT的試劑作陰性對照。結(jié)果判定：TUNEL法檢測陽性表現(xiàn)為在腫瘤組織中散在分布胞核呈棕黃色顆粒著色的細(xì)胞(見圖3)。在400倍光鏡下，隨機(jī)選擇10個(gè)視野并計(jì)數(shù)1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞，記錄凋亡細(xì)胞數(shù)。計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI），AI=（凋亡細(xì)胞數(shù)/1 000）×100%［1］。
圖3 細(xì)胞凋亡陽性表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞核呈棕黃色顆粒（×400）（略）
1.3 統(tǒng)計(jì)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包處理，數(shù)據(jù)以±s表示，采用t檢驗(yàn)，方差分析，相關(guān)分析，cox多因數(shù)分析，以P＜0.05作為差異有顯著意義的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
2 結(jié)果
2.1 檢查 83例膀胱移行細(xì)胞癌中,有42例(50.6%) P53陽性,49例(59.03%) MDM2陽性，AI=1.433 5±0.386 3。
2.2 病理分級及臨床分期中比較 MDM2Ⅰ級、Ⅱ級與Ⅲ級間表達(dá)差異有顯著性(P＜0.05)，Ⅰ級與Ⅱ級間表達(dá)差異無顯著性(P＞0.05)；P53Ⅰ級與Ⅱ、Ⅲ級間表達(dá)差異有顯著性(P＜0.05)，Ⅱ級、Ⅲ級間表達(dá)差異無顯著性(P＞0.05)。MDM2在TaT1與T2T4間表達(dá)差異有顯著性(P＜0.05）,P53在兩組中表達(dá)差異無顯著性(P＞0.05)。AI在Ⅰ級、Ⅱ級與Ⅲ級間表達(dá)及TaT1與T2T4間表達(dá)差異有顯著性(P＜0.01)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),MDM2陽性表達(dá)與病理分級及臨床分期呈負(fù)相關(guān)(R=-0.263,P=0.016；R=-0.388,P=0.001);P53陽性表達(dá)與病理分級及臨床分期呈正相關(guān)(R=0.492,P=0.001；R=0.341，P=0.002);MDM2、P53兩種蛋白間表達(dá)無相關(guān)性；AI與MDM2呈負(fù)相關(guān)（R=-0.226,P=0.042）；AI與病理分級及臨床分期呈正相關(guān)(R=0.642,P=0.000；R=0.455，P=0.000)；AI與P53無相關(guān)性。5 a隨訪AI及P53復(fù)發(fā)死亡組顯著高于無復(fù)發(fā)組；MDM2復(fù)發(fā)死亡組顯著低于無復(fù)發(fā)組。詳見表1。
2.3 MDM2基因在P53基因陽性表達(dá)在膀胱癌中的表達(dá) 分析發(fā)現(xiàn)P53陽性表達(dá)合并MDM2陽性表達(dá)多見于分化好的膀胱癌Ⅰ級、Ⅱ級與Ⅲ級間表達(dá)差異有顯著性(P＜0.05詳見表2。
表1 Pgp、MDM2、P53表達(dá)與病理分級及臨床分期的關(guān)系（略）
注：*P＜0.05**P＜0.01
表2 MDM2基因在P53基因陽性表達(dá)膀胱癌中的表達(dá)（略）
注：*P＜0.05
【膀胱癌細(xì)胞凋亡與MDM2和P53基因表達(dá)的意義】相關(guān)文章：
腺病毒介導(dǎo)凋亡素基因?qū)θ四懝馨┘?xì)胞凋亡的研究03-08
SiRNA穩(wěn)定抑制肝癌細(xì)胞hTERT基因的表達(dá)03-19
腦缺血與凋亡相關(guān)基因的變化03-08
腺性膀胱炎術(shù)后膀胱灌注的方法和護(hù)理03-16
擬Smac作用下膀胱癌T24 細(xì)胞增殖及凋亡的研究03-02
PRAME基因在急性白血病中的表達(dá)及臨床意義分析03-08