探討微米大黃炭治療胃潰瘍出血的止血作用機制

探討微米大黃炭治療胃潰瘍出血的止血作用機制

摘要： 【目的】探討微米大黃炭治療胃潰瘍出血的止血作用機制�！痉椒ā窟x用昆明種小鼠和SD大鼠為研究對象，隨機分為空白對照組、云南白藥組（劑量為9g·kg-1·d-1）和微米大黃炭高、中、低劑量組（劑量分別為8、4、2g·kg-1·d-1），灌胃給藥6d后檢測小鼠出、凝血時間及血小板計數；測定大鼠血小板功能及纖溶活性等指標�！窘Y果】與空白對照組比較，微米大黃炭各劑量組均能縮短小鼠出、凝血時間（Ｐ＜０?０1），增加血小板計數（Ｐ＜０?０5或Ｐ＜０?０1），提高大鼠血小板聚集性，上調血栓烷素B2（TXB2）而下調6?酮?前列腺素F1α（6?keto?PGF1α）水平（Ｐ＜０?０５或Ｐ＜０?０1），升高血小板顆粒膜蛋白?140（GMP?140）含量（Ｐ＜０?０5或Ｐ＜０?０1）；縮短大鼠凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）（Ｐ＜０?０1），而對組織型纖溶酶原激活劑（t?PA）和組織型纖溶酶原抑制劑（PAI?1）活性無顯著影響（Ｐ＞０?０５）�！窘Y論】通過激活內源性和外源性途徑的多種凝血因子而促進凝血過程中的凝血酶原和凝血活酶的生成，增加血小板計數和聚集性可能是微米大黃炭止血的重要作用機制。

關鍵詞：微米大黃炭/藥理學；胃腸出血/中藥療法；疾病模型，動物；大鼠；小鼠

微米大黃炭為武漢市第一醫院治療消化性潰瘍并出血的新型中藥制劑，臨床運用療效確切［1］。本研究觀察了該制劑對實驗動物凝血時間、血液凝固系統、纖溶系統及血小板的影響，闡明其治療胃潰瘍出血的止血作用機制，現報道如下。
1材料與方法
1?1藥物微米大黃炭由武漢市中西醫結合醫院制劑科制備（批號：200506）；云南白藥由云南白藥集團股份有限公司生產（批號：20051113）。
1?2動物清潔級昆明種小鼠180只，體質量（20±2）g，雌雄各半，由同濟醫學院實驗動物室提供，合格證號：SCXK（鄂）2004?0007；清潔級SD大鼠100只，體質量200~250g，雌雄各半，由同濟醫科大學動物中心提供，合格證號：SCXK（鄂）2004?0007。
1?3試劑與儀器大鼠組織型纖溶酶原激活劑及其抑制劑（t?PA/PAI?1）試劑盒及血小板顆粒膜蛋白?140（GMP?140）試劑盒均由大連泛邦化工有限公司提供；125I?6?酮?前列腺素F1α（6?keto?PGF1α）放射免疫分析藥盒、125I?血栓烷素B2（TXB2）放射免疫分析藥盒均購自北京科美東雅生物技術有限公司（生產批號：20060725）；LBY?NJ2型血液凝聚儀（北京普利生公司產品）；MK3型Thermo酶標儀（上海熱電儀器有限公司）；DFM?96型多管放射免疫計數器（合肥眾成機電技術公司）。
1?4指標檢測
1?4?1凝血時間和出血時間的測定取昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分為微米大黃炭低、中、高劑量組（簡稱大黃炭低、中、高劑量組），云南白藥組和空白對照組5組，每組12只，大黃炭低、中、高劑量組分別以2、4、8g·kg-1·d-1劑量灌胃給藥，云南白藥組給予云南白藥，劑量為9g·kg-1·d-1，空白對照組給予等容積生理鹽水。連續給藥6d，1次/d。于末次給藥1h后，按毛細血管法［2］測定凝血時間，以斷尾法［3］記錄小鼠出血時間。
1?4?2血小板計數的測定取昆明種小鼠60只，分組方法及給藥方法同1?4?1，每組12只，于末次給藥1h后摘取右側眼球取血0?5mL，在全自動血小板計數儀上檢測。
1?4?3血小板凝集性測定取SD大鼠50只，雌雄各半，分組方法及給藥方法同1?4?1，每組10只。于末次給藥0?5h后，30mg/L戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心臟穿刺取血1?8mL，按說明書要求分離富含血小板血漿（PRP）和血小板血漿（PPP），分別置于比色杯中，調整好透光度后，將誘導劑二磷酸腺苷（ADP）2μmol(1μmol/mL)加入PRP中，記錄濁度改變曲線及最大聚集率（pMA/%）。
1?4?4TXB2、6?keto?PGF1α及血小板GMP?140含量測定取清潔級SD大鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法同1?4?1，每組10只。末次給藥后0?5h后，按0?02mL/kg劑量腹腔內注射20mg/L戊巴比妥鈉麻醉，心臟穿刺取血2mL，用消炎痛乙二胺四乙酸二鈉（EDTANa2）抗凝備檢，以3 000r/min離心10min，分離血漿，嚴格按試劑盒說明書步驟操作，采用放射免疫法測定TXB2和6?keto?PGF1α含量，采用酶聯免疫吸附（ELISA）雙抗體夾心法測定GMP?140含量。
1?4?5組織型纖溶酶原激活劑（t?PA）及其抑制劑（PAI?1）水平測定取清潔級SD大鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法同1?4?1，每組10只。末次給藥后1h，以30mg/L戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心臟穿刺取血2mL，用EDTANa2抗凝備檢，3 500r/min離心15min，分離血漿，采用ELISA法檢測t?PA、PAI?1水平。
1?4?6凝血酶原時間（PT）和活化部分凝血活酶時間（APTT）測定取清潔級SD大鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法同1?4?1，每組10只。末次給藥后1h,以30mg/L戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心臟穿刺取血1?8mL，38mg/L枸椽酸鈉（與血液容積比為1∶9）抗凝，以3 000r/min離心10min分離血漿后，在全自動血凝分析儀上檢測PT和APTT值。
1?5統計學方法采用SPSS 13?0統計軟件進行統計分析。
2結果
2?1各組對小鼠出、凝血時間及血小板計數的影響表1結果顯示，大黃炭高、中、低劑量組和云南白藥組均能縮短小鼠出、凝血時間，與空白對照組比較有顯著性差異（P＜0?01）；與云南白藥組比較，大黃炭高劑量組作用顯著（P＜0?05）。各給藥組均能顯著提高小鼠血小板計數（P＜0?05），其中大黃炭高、中劑量組作用顯著（P＜0?01）；與云南白藥組比較，大黃炭高劑量組可顯著提高小鼠血小板計數（P＜0?05）。
2?2各組對大鼠血小板聚集性及TXB2、6?keto?PGF1α、GMP?140含量的影響表2結果顯示，各給藥組均能顯著提高血小板最大聚集率及TXB2、GMP?140含量（P＜0?05或P＜0?01），顯著降低6?keto?PGF1α含量（P＜0?05或

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