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      2. 中藥芪參復(fù)康對(duì)焦慮模型大鼠βEP及細(xì)胞因子的影響

        時(shí)間:2024-05-24 11:50:45 藥學(xué)畢業(yè)論文 我要投稿
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        中藥芪參復(fù)康對(duì)焦慮模型大鼠βEP及細(xì)胞因子的影響

           【摘要】 目的: 對(duì)中藥芪參復(fù)康 (QSFK) 膠囊抗焦慮作用的神經(jīng)?免疫調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行初步探討. 方法: 采用國(guó)際通用的高架十字迷宮模型(EPM)焦慮動(dòng)物模型,用丁螺環(huán)酮(Bus)作對(duì)照,觀察QSFK對(duì)EPM大鼠β?EP,血清NO,IL?1β,IL?6和TNFα的影響. 結(jié)果: 與模型組比較,QSFK和Bus均能降低EPM大鼠血漿β?EP含量(P<0.01),對(duì)下丘腦β?EP水平無(wú)明顯影響;但兩組均能升高EPM焦慮模型大鼠血清NO水平(P<0.05);QSFK還可升高EPM大鼠血清IL?1β和TNFα水平,對(duì)IL?6含量無(wú)明顯影響;Bus并不能改變此焦慮模型大鼠的血清細(xì)胞因子水平. 結(jié)論: QSFK降低血漿β?EP含量,提高血清NO濃度和EPM血清IL?1β和TNFα水平,以調(diào)節(jié)焦慮狀態(tài)下機(jī)體免疫功能紊亂.

          0引言

          芪參復(fù)康 (qishenfukang, QSFK) 膠囊是我院臨床主要用于治療肝血不足,血不養(yǎng)心,虛熱內(nèi)擾之虛煩不得入眠引起的焦慮癥方劑. 以往實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,QSFK膠囊可增加動(dòng)物的自發(fā)活動(dòng),增強(qiáng)其體力,并能逆轉(zhuǎn)強(qiáng)制冷水游泳應(yīng)激所致腎上腺VitC含量的變化[1],顯示該制劑具有抗應(yīng)激和抗焦慮作用. 我們采用國(guó)際上通用的焦慮動(dòng)物模型高架十字迷宮模型(the elevated plus?maze test, EPM),觀察了QSFK對(duì)EPM大鼠β?內(nèi)啡肽(β?EP)、血清一氧化氮(NO)、白細(xì)胞介素1β(IL?1β)、白細(xì)胞介素6(IL?6)、腫瘤壞死因子α(TNFα)等細(xì)胞因子水平的影響,對(duì)本方抗焦慮作用的神經(jīng)?免疫調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行初步探討.

          1材料和方法

          1.1材料SD品系雄性大鼠,體質(zhì)量(180±10)g,由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供. QSFK膠囊是由炙黃芪15 g、西洋參10 g、白術(shù)10 g、天麻10 g、枸杞子10 g、熟地黃10 g、白芍10 g、阿膠10 g、丹參10 g、當(dāng)歸10 g、川芎10 g、淫羊藿10 g、酸棗仁15 g、遠(yuǎn)志10 g、茯苓10 g、鹿茸5 g中藥材組成. 由本院中藥制劑中心提供,0.3 g/粒. 丁螺環(huán)酮片劑(buspirone, Bus)5 mg/片,為西南合成制藥股份有限公司產(chǎn)品. 研缽粉碎后用蒸餾水溶解,加入20 g/L羧甲基纖維素鈉1~2滴充分混勻,配成100 g/L濃度. 4℃保存,使用前混搖均勻. β?EP放免試劑盒由第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室提供;IL?1β,IL?6,TNFα放免試劑盒由解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免研究所提供; DigBehv?EPMR型大鼠高架十字迷宮為上海吉量軟件科技有限公司產(chǎn)品;SN?695B型智能放免γ測(cè)量?jī)x為上海核所日環(huán)光電儀器有限公司產(chǎn)品;DU?7型紫外分光光度計(jì)為美國(guó)Beckman公司產(chǎn)品.

          1.2方法大鼠每籠10只,不限食水. 室溫(18±2)℃,保持安靜. 將大鼠隨機(jī)分為模型,BUS, QSFK共3組,每組10只. 其中QSFK組按1.2 g/(kg·d)給予灌胃,Bus組給予1 mg/(kg·d)灌胃,模型組灌服等容積的生理鹽水. 各組連續(xù)給藥10 d,末次給藥1 h后做行為學(xué)測(cè)試[2]. 大鼠EPM行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后,立即斷頭處死,迅速在冰盤(pán)上剪開(kāi)顱蓋和腦膜,分離下丘腦,稱質(zhì)量,制成勻漿,加入1 mol/L HAC 1 mL,室溫放置2 h,再加入1 mol/L NaOH 1 mL,中和酸,4℃,4000 r/min,離心20 min,取上清液,置-20℃冰箱保存待測(cè)下丘腦β?EP;斷頭取血,其中2 mL置于加入0.3 mol/L EDTA?2Na 40 μL和抑肽酶40 μL抗凝劑的試管中,4℃,4000 r/min,離心20 min,取血漿,待測(cè)血漿β?EP;其余血液室溫放置,3000 r/min,離心20 min,取血清,-20℃冰箱保存待測(cè)NO, IL?1β, IL?6, TNFα. 其中NO測(cè)定按照NO試劑盒(南京生物醫(yī)學(xué)制劑公司)說(shuō)明在DU?7型紫外分光光度計(jì)上測(cè)定NO濃度. β?EP, IL?1β, IL?6, TNFα均采用放免法嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行測(cè)定.

          統(tǒng)計(jì)學(xué)處理: 各組數(shù)據(jù)用x±s表示,采用單因素方差分析(One?way ANOVA)及Student Newman Keuls檢驗(yàn),全部數(shù)據(jù)用SPSS 11.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件處理.

          2結(jié)果

          2.1QSFK對(duì)EPM大鼠β?EP的影響與模型組比較,Bus和QSFK組大鼠下丘腦β?EP水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),但血漿β?EP含量降低(P<0.05, P<0.01);血清NO水平均升高(P<0.05),其中QSFK組升高更為明顯(表1). 表1QSFK對(duì)EPM大鼠β?EP和NO的影響

          2.2QSFK對(duì)EPM大鼠血清細(xì)胞因子的影響與模型組比較,QSFK組大鼠血清IL?1β, TNFα水平升高(P<0.05),但血清IL?6含量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Bus組大鼠的血清IL?1β, IL?6 和 TNFα均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2). 表2QSFK對(duì)EPM大鼠血清免疫細(xì)胞因子水平的影響

          3討論

          焦慮癥可能通過(guò)神經(jīng)?內(nèi)分泌?免疫機(jī)制對(duì)機(jī)體健康產(chǎn)生廣泛影響. 我們分別選取中樞神經(jīng)、免疫系統(tǒng)與焦慮發(fā)病密切相關(guān)的神經(jīng)調(diào)質(zhì)、免疫細(xì)胞因子為觀測(cè)指標(biāo),探察QSFK對(duì)EPM模型大鼠相關(guān)指標(biāo)的影響,以探討其與抗焦慮作用可能有關(guān)的神經(jīng)?免疫調(diào)節(jié)機(jī)制. 研究發(fā)現(xiàn),焦慮與腦干的LC神經(jīng)釋放增加有關(guān),能抑制LC釋放β?EP的藥物被認(rèn)為具有抗焦慮作用[3]. 因此神經(jīng)肽與焦慮的關(guān)系近來(lái)倍受關(guān)注. 本結(jié)果顯示,QSFK可顯著降低EPM大鼠血漿β?EP水平,對(duì)中樞β?EP無(wú)明顯影響,推測(cè)QSFK可能抑制了焦慮應(yīng)激狀態(tài)下垂體β?EP的釋放,或者直接作用于腎上腺髓質(zhì)而抑制了β?EP的產(chǎn)生. 我們發(fā)現(xiàn),QSFK可降低EPM大鼠血漿β?EP水平,推測(cè)其有可能通過(guò)抑制EPM焦慮狀態(tài)下的β?EP釋放以減少5?HT的釋放,改善焦慮狀態(tài);同時(shí)還可通過(guò)降低外周β?EP水平,減弱β?EP對(duì)免疫抑制作用,以改善焦慮癥可能出現(xiàn)的免疫功能紊亂.

          NO被認(rèn)為是焦慮障礙的神經(jīng)生物化學(xué)機(jī)制之一,有研究報(bào)道焦慮患者血中NO濃度顯著降低. 我們觀察到,1 mg/kg Bus可以明顯升高經(jīng)EPM探究后大鼠血清NO水平,推測(cè)作為抗焦慮藥物Bus的抗焦慮作用除了已經(jīng)了解到的對(duì)中樞神經(jīng)遞質(zhì)、調(diào)質(zhì)影響之外,可能還包括對(duì)NO調(diào)節(jié)的機(jī)制,值得進(jìn)一步研究. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示,QSFK也可顯著升高EPM大鼠血清NO水平,提示其抗焦慮作用可能與提高血清NO濃度有關(guān). 免疫系統(tǒng)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響是通過(guò)IL?lβ, TNFα等細(xì)胞因子實(shí)現(xiàn)的,這些被稱為免疫調(diào)節(jié)遞質(zhì)的細(xì)胞因子的激活可以引起一系列生理、行為、情感和認(rèn)知的改變. 迄今為止,焦慮與其伴有的機(jī)體免疫功能改變的心身交互作用機(jī)制及其因果關(guān)系目前尚不十分清楚,有關(guān)焦慮患者免疫功能的研究結(jié)論也不一,但有許多資料表明焦慮患者確實(shí)存在免疫功能的失調(diào)[5],在異常免疫狀態(tài)可引發(fā)焦慮[6]. 我們觀察到,在經(jīng)EPM探究后即刻時(shí)間,1.2 g/kg劑量QSFK可以顯著提高EPM大鼠血清IL?1β,TNFα水平,對(duì)IL?6影響不明顯,提示QSFK可使EPM大鼠經(jīng)EPM探究本已升高的細(xì)胞因子水平繼續(xù)升高,推測(cè)可能與加強(qiáng)機(jī)體對(duì)外來(lái)刺激的防御性保護(hù)反應(yīng)有關(guān). 我們發(fā)現(xiàn),QSFK可降低EPM焦慮模型大鼠β?EP的釋放,提高血清NO水平,推測(cè)QSFK有可能通過(guò)上述途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié),改善焦慮癥可能伴有的免疫功能失調(diào).

          【參考文獻(xiàn)】

          [1] 李新田,邱財(cái)榮,楊來(lái)啟,等. 芪參復(fù)康膠囊對(duì)強(qiáng)制冷水游泳應(yīng)激大鼠行為及腎上腺Vitc含量的影響[J]. 中國(guó)藥房,2007:18(增刊):3-4.

          [2] 徐叔云,如濂,陳修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 3版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:817.

          [3] 沈漁邨. 精神病學(xué)[M]. 3版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:678-683.

          [4] 鐘慈聲,孫安陽(yáng). 一氧化氮的生物醫(yī)學(xué)[M]. 上海: 上海醫(yī)科大學(xué)出版社,1997:89.

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