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中藥芪參復康對焦慮模型大鼠βEP及細胞因子的影響
【摘要】 目的： 對中藥芪參復康 (QSFK) 膠囊抗焦慮作用的神經?免疫調節機制進行初步探討. 方法： 采用國際通用的高架十字迷宮模型(EPM)焦慮動物模型，用丁螺環酮(Bus)作對照，觀察QSFK對EPM大鼠β?EP，血清NO，IL?1β，IL?6和TNFα的影響. 結果： 與模型組比較，QSFK和Bus均能降低EPM大鼠血漿β?EP含量(P<0.01)，對下丘腦β?EP水平無明顯影響;但兩組均能升高EPM焦慮模型大鼠血清NO水平(P<0.05);QSFK還可升高EPM大鼠血清IL?1β和TNFα水平，對IL?6含量無明顯影響;Bus并不能改變此焦慮模型大鼠的血清細胞因子水平. 結論： QSFK降低血漿β?EP含量，提高血清NO濃度和EPM血清IL?1β和TNFα水平，以調節焦慮狀態下機體免疫功能紊亂.
0引言
芪參復康 (qishenfukang, QSFK) 膠囊是我院臨床主要用于治療肝血不足，血不養心，虛熱內擾之虛煩不得入眠引起的焦慮癥方劑. 以往實驗結果表明，QSFK膠囊可增加動物的自發活動，增強其體力，并能逆轉強制冷水游泳應激所致腎上腺VitC含量的變化[1]，顯示該制劑具有抗應激和抗焦慮作用. 我們采用國際上通用的焦慮動物模型高架十字迷宮模型(the elevated plus?maze test, EPM)，觀察了QSFK對EPM大鼠β?內啡肽(β?EP)、血清一氧化氮(NO)、白細胞介素1β(IL?1β)、白細胞介素6(IL?6)、腫瘤壞死因子α(TNFα)等細胞因子水平的影響，對本方抗焦慮作用的神經?免疫調節機制進行初步探討.
1材料和方法
1.1材料SD品系雄性大鼠，體質量(180±10)g，由西安交通大學實驗動物中心提供. QSFK膠囊是由炙黃芪15 g、西洋參10 g、白術10 g、天麻10 g、枸杞子10 g、熟地黃10 g、白芍10 g、阿膠10 g、丹參10 g、當歸10 g、川芎10 g、淫羊藿10 g、酸棗仁15 g、遠志10 g、茯苓10 g、鹿茸5 g中藥材組成. 由本院中藥制劑中心提供，0.3 g/粒. 丁螺環酮片劑(buspirone, Bus)5 mg/片，為西南合成制藥股份有限公司產品. 研缽粉碎后用蒸餾水溶解，加入20 g/L羧甲基纖維素鈉1～2滴充分混勻，配成100 g/L濃度. 4℃保存，使用前混搖均勻. β?EP放免試劑盒由第二軍醫大學神經生物學教研室提供;IL?1β，IL?6，TNFα放免試劑盒由解放軍總醫院科技開發中心放免研究所提供; DigBehv?EPMR型大鼠高架十字迷宮為上海吉量軟件科技有限公司產品;SN?695B型智能放免γ測量儀為上海核所日環光電儀器有限公司產品;DU?7型紫外分光光度計為美國Beckman公司產品.
1.2方法大鼠每籠10只，不限食水. 室溫(18±2)℃，保持安靜. 將大鼠隨機分為模型,BUS, QSFK共3組，每組10只. 其中QSFK組按1.2 g/(kg·d)給予灌胃，Bus組給予1 mg/(kg·d)灌胃，模型組灌服等容積的生理鹽水. 各組連續給藥10 d，末次給藥1 h后做行為學測試[2]. 大鼠EPM行為學測試結束后，立即斷頭處死，迅速在冰盤上剪開顱蓋和腦膜，分離下丘腦，稱質量，制成勻漿，加入1 mol/L HAC 1 mL，室溫放置2 h，再加入1 mol/L NaOH 1 mL，中和酸，4℃，4000 r/min，離心20 min，取上清液，置-20℃冰箱保存待測下丘腦β?EP;斷頭取血，其中2 mL置于加入0.3 mol/L EDTA?2Na 40 μL和抑肽酶40 μL抗凝劑的試管中，4℃，4000 r/min，離心20 min，取血漿，待測血漿β?EP;其余血液室溫放置，3000 r/min，離心20 min，取血清，-20℃冰箱保存待測NO, IL?1β, IL?6, TNFα. 其中NO測定按照NO試劑盒(南京生物醫學制劑公司)說明在DU?7型紫外分光光度計上測定NO濃度. β?EP, IL?1β, IL?6, TNFα均采用放免法嚴格按試劑盒說明書方法進行測定.
統計學處理： 各組數據用x±s表示，采用單因素方差分析(One?way ANOVA)及Student Newman Keuls檢驗，全部數據用SPSS 11.0 for windows統計軟件處理.
2結果
2.1QSFK對EPM大鼠β?EP的影響與模型組比較，Bus和QSFK組大鼠下丘腦β?EP水平無統計學差異(P>0.05)，但血漿β?EP含量降低(P<0.05, P<0.01);血清NO水平均升高(P<0.05)，其中QSFK組升高更為明顯(表1). 表1QSFK對EPM大鼠β?EP和NO的影響
2.2QSFK對EPM大鼠血清細胞因子的影響與模型組比較，QSFK組大鼠血清IL?1β, TNFα水平升高(P<0.05)，但血清IL?6含量變化無統計學意義(P>0.05);Bus組大鼠的血清IL?1β, IL?6 和 TNFα均無統計學意義(表2). 表2QSFK對EPM大鼠血清免疫細胞因子水平的影響
3討論
焦慮癥可能通過神經?內分泌?免疫機制對機體健康產生廣泛影響. 我們分別選取中樞神經、免疫系統與焦慮發病密切相關的神經調質、免疫細胞因子為觀測指標，探察QSFK對EPM模型大鼠相關指標的影響，以探討其與抗焦慮作用可能有關的神經?免疫調節機制. 研究發現，焦慮與腦干的LC神經釋放增加有關，能抑制LC釋放β?EP的藥物被認為具有抗焦慮作用[3]. 因此神經肽與焦慮的關系近來倍受關注. 本結果顯示，QSFK可顯著降低EPM大鼠血漿β?EP水平，對中樞β?EP無明顯影響，推測QSFK可能抑制了焦慮應激狀態下垂體β?EP的釋放，或者直接作用于腎上腺髓質而抑制了β?EP的產生. 我們發現，QSFK可降低EPM大鼠血漿β?EP水平，推測其有可能通過抑制EPM焦慮狀態下的β?EP釋放以減少5?HT的釋放，改善焦慮狀態;同時還可通過降低外周β?EP水平，減弱β?EP對免疫抑制作用，以改善焦慮癥可能出現的免疫功能紊亂.
NO被認為是焦慮障礙的神經生物化學機制之一,有研究報道焦慮患者血中NO濃度顯著降低. 我們觀察到，1 mg/kg Bus可以明顯升高經EPM探究后大鼠血清NO水平，推測作為抗焦慮藥物Bus的抗焦慮作用除了已經了解到的對中樞神經遞質、調質影響之外，可能還包括對NO調節的機制，值得進一步研究. 實驗結果還顯示，QSFK也可顯著升高EPM大鼠血清NO水平，提示其抗焦慮作用可能與提高血清NO濃度有關. 免疫系統對神經系統的影響是通過IL?lβ, TNFα等細胞因子實現的，這些被稱為免疫調節遞質的細胞因子的激活可以引起一系列生理、行為、情感和認知的改變. 迄今為止，焦慮與其伴有的機體免疫功能改變的心身交互作用機制及其因果關系目前尚不十分清楚，有關焦慮患者免疫功能的研究結論也不一，但有許多資料表明焦慮患者確實存在免疫功能的失調[5]，在異常免疫狀態可引發焦慮[6]. 我們觀察到，在經EPM探究后即刻時間，1.2 g/kg劑量QSFK可以顯著提高EPM大鼠血清IL?1β，TNFα水平，對IL?6影響不明顯，提示QSFK可使EPM大鼠經EPM探究本已升高的細胞因子水平繼續升高，推測可能與加強機體對外來刺激的防御性保護反應有關. 我們發現，QSFK可降低EPM焦慮模型大鼠β?EP的釋放，提高血清NO水平，推測QSFK有可能通過上述途徑實現對機體免疫功能的調節，改善焦慮癥可能伴有的免疫功能失調.
【參考文獻】
[1] 李新田，邱財榮，楊來啟，等. 芪參復康膠囊對強制冷水游泳應激大鼠行為及腎上腺Vitc含量的影響[J]. 中國藥房，2007：18(增刊)：3-4.
[2] 徐叔云，卞如濂，陳修. 藥理實驗方法學[M]. 3版. 北京：人民衛生出版社，2002：817.
[3] 沈漁邨. 精神病學[M]. 3版. 北京：人民衛生出版社，1995：678-683.
[4] 鐘慈聲，孫安陽. 一氧化氮的生物醫學[M]. 上海： 上海醫科大學出版社，1997：89.
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