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幽門(mén)螺桿菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與應(yīng)用價(jià)值
作者：胥維勇，楊紅，楊群，范小莉，何娟1983年由澳大利亞醫(yī)生R·Warren和B·Marshall從胃黏膜組織中成功分離培養(yǎng)出幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)以來(lái),Hp與慢性活動(dòng)性胃炎和消化性潰瘍以及在發(fā)病過(guò)程中的作用已得到證實(shí)。但Hp感染缺乏臨床表現(xiàn)特征，Hp感染診斷主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。Hp檢測(cè)技術(shù)日益完善和準(zhǔn)確，方法從細(xì)菌形態(tài)學(xué)發(fā)展進(jìn)入到Hp全基因序列測(cè)定分析階段。Hp感染檢測(cè)方法可分為：取胃黏膜標(biāo)本檢測(cè)Hp，包括細(xì)菌培養(yǎng)、快速尿素酶試驗(yàn)、組織涂片和切片染色；呼氣試驗(yàn)和尿氨排出試驗(yàn)檢測(cè)Hp；血清免疫學(xué)方法檢測(cè)Hp。根據(jù)檢測(cè)是否需做胃鏡檢查分為：直接檢測(cè)法，必須在胃鏡下取材，包括細(xì)菌培養(yǎng)、涂片染色、快速尿素酶試驗(yàn)、活檢標(biāo)本切片染色和多聚酶鏈反應(yīng)等；間接檢測(cè)法，不需要胃鏡下取材，包括13 C、14 C呼氣試驗(yàn)、15 N尿氨排出試驗(yàn)和血清免疫學(xué)檢測(cè)等。Hp感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的常用方法有：
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1 微生物學(xué)方法
1.1 細(xì)菌培養(yǎng)法 從胃黏膜活檢標(biāo)本中分離培養(yǎng)出Hp，再用形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)方法鑒定，是診斷Hp感染最可靠的方法。Hp是微需氧菌，不能在大氣下和絕對(duì)厭氧條件下生長(zhǎng)，它需要的氣體條件是N2 85%、CO2 10%、O2 5%，還需要有一定的濕度和較好的營(yíng)養(yǎng)成分。Hp生長(zhǎng)緩慢，形成的菌落細(xì)小，必須添加抑制雜菌生長(zhǎng)的抗生素，才能提高Hp的檢出率。盡管Hp感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是分離培養(yǎng)，但它需要一些特殊設(shè)備和試驗(yàn)條件，國(guó)內(nèi)尚未廣泛開(kāi)展，至今只有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室把它用于科研，而不作為常規(guī)檢測(cè)而用于臨床。
1.2 涂片檢測(cè)法 在胃鏡檢查時(shí)用細(xì)胞刷在胃黏膜表面刷取黏液成分或取活檢標(biāo)本直接涂片，經(jīng)革蘭(Grams)染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察，Hp呈Grams陰性，彎曲狀、弧狀、S形和C形，形態(tài)特征較明顯。涂片檢測(cè)Hp是一種簡(jiǎn)單實(shí)用的方法,涂片標(biāo)本未經(jīng)任何處理不受外界因素影響，菌體保持完整，形態(tài)與生活時(shí)相仿。為簡(jiǎn)便染色過(guò)程,Grams染色亦可簡(jiǎn)化為石碳酸復(fù)紅單染法［1］，染色效果不比Grams染色遜色。還可采用相差顯微鏡直接觀察涂片檢測(cè)Hp和用吖啶橙染色，熒光顯微鏡觀察檢測(cè)Hp。
2 快速尿素酶試驗(yàn)
Hp產(chǎn)生尿素酶的能力強(qiáng)，尿素酶分解胃液中尿素生成NH3和CO2，快速尿素酶試驗(yàn)用于胃鏡檢查中診斷有無(wú)Hp感染。試驗(yàn)試劑包括尿素、pH指示劑(酚紅)、緩沖液和防腐劑。在酸性條件下，當(dāng)pH值≤6.8時(shí)，酚紅指示劑呈黃褐色，如果活檢標(biāo)本中有Hp存在，尿素酶分解尿素產(chǎn)生NH3使試劑pH值發(fā)生變化而升至≥8.4，這時(shí)酚紅指示劑由黃褐色變?yōu)榧t或紫紅色。目前常用的尿素酶試劑在與胃鏡活檢標(biāo)本接觸后幾分鐘后便可顯色，快速尿素酶試驗(yàn)屬于間接試驗(yàn)，標(biāo)本大小、細(xì)菌多少、反應(yīng)時(shí)間、溫度和濕度均可影響尿素酶試驗(yàn)結(jié)果。尿素酶試驗(yàn)具有快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，特別適合基層醫(yī)院推廣使用。
3 同位素示蹤劑方法
這類(lèi)方法主要是采用讓患者口服同位素標(biāo)記的尿素，利用Hp產(chǎn)生尿素酶能分解尿素的原理，以觀察胃中Hp分解尿素的能力，以此判斷患者是否感染了Hp及感染的程度，這類(lèi)試驗(yàn)現(xiàn)有兩類(lèi)三種。Hp具有較強(qiáng)的內(nèi)源性尿素酶，能分解胃內(nèi)及核素標(biāo)記的尿素，產(chǎn)生CO2和NH3,CO2被吸收后經(jīng)肺呼出，分析呼氣中的13 CO2或14 CO2即可診斷Hp的存在。根據(jù)呼氣試驗(yàn)類(lèi)似的原理，15 N?尿氨排出試驗(yàn)是一種尿素在胃內(nèi)分解后，15 N經(jīng)吸收通過(guò)腎臟由尿排出的試驗(yàn)，讓受試者口服穩(wěn)定性同位素15 N標(biāo)記的尿素，然后測(cè)定尿液中排出的15 NH3來(lái)判斷胃內(nèi)Hp的感染情況。這類(lèi)試驗(yàn)方法屬于間接檢測(cè)，通過(guò)多次采集樣本后在儀器上進(jìn)行測(cè)定分析。
3.1 呼氣試驗(yàn) 呼氣試驗(yàn)的原理是基于Hp產(chǎn)生大量的尿素酶，給感染Hp的患者口服同位素標(biāo)記尿素溶液，則尿素被分解后產(chǎn)生同位素標(biāo)記CO2由肺呼出�？墒占魵鈽颖�，用氣體同位素質(zhì)譜儀或液體閃爍掃描儀檢測(cè)同位素標(biāo)記CO2的量來(lái)檢測(cè)Hp。根據(jù)標(biāo)記物的不同，分為13 C和14 C呼氣試驗(yàn)。
3.1.1 13 C標(biāo)記的尿素 用穩(wěn)定性同位素13 C標(biāo)記的尿素，讓患者口服后，尿素在胃中與Hp產(chǎn)生的尿素酶接觸后分解成13 CO2，測(cè)定其在總呼出量中所占的濃度，以判斷胃中是否感染了Hp和感染程度。這種方法的最大優(yōu)點(diǎn)是：體內(nèi)測(cè)定胃內(nèi)感染Hp的總體情況，避免了活檢標(biāo)本Hp分布不均造成的假陰性的結(jié)果；13 C是一種穩(wěn)定性同位素，對(duì)機(jī)體無(wú)損傷；它除了定性以外，還可做定量測(cè)定。它的最大缺點(diǎn)是需用高精度氣體比值同位素質(zhì)譜儀來(lái)測(cè)定，這種設(shè)備是一般醫(yī)院不具備的貴重儀器。
3.1.2 14 C標(biāo)記的尿素 用14 C標(biāo)記的尿素讓患者口服，用閃爍掃描儀測(cè)定患者呼出的14 CO2，這種儀器在有核醫(yī)學(xué)科的醫(yī)院一般都有，測(cè)定方法比較方便。盡管它的優(yōu)點(diǎn)類(lèi)似于13 CO2呼氣試驗(yàn)，但是14C是一種放射性同位素，因此這項(xiàng)試驗(yàn)對(duì)孕婦和小孩不宜使用。 論文網(wǎng)在線(xiàn)
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