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十三種殺菌劑對草莓膠孢炭疽菌的室內毒力測定
摘要：在實驗室條件下，采用菌絲生長速率法測定了13種殺菌劑對發生在湖北的草莓膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的生物活性。結果表明，供試殺菌劑對草莓炭疽病菌菌絲抑制作用存在明顯差異，對草莓膠孢炭疽病病菌毒力最強的是好立克、丙環·咪鮮胺和施保功，其EC50值分別為0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L，福星、施保克、百泰、世高、凱特、溴菌腈和凱潤的EC50值均相對很低，這10種殺菌劑均可作為防治草莓膠孢炭疽病的首選殺菌劑;腈菌唑、翠貝和二氰蒽醌的抑制活性較差，EC50值分別為12.12、17.58和106.99 mg/L。
關鍵詞：草莓炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides);毒力測定;殺菌劑;篩選
Toxicity Test of 13 Types of Fungicides for Strawberry Anthracnose in Laboratory
ZENG Xiang-guo，XIANG Fa-yun，ZHANG Peng，HAN Yong-chao，WU Run-ling，GU Yu-cheng，WANG Qing-fang
(Institute of Economic Crops， Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China)
Abstract：The bioassay of 13 fungicides against Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.，which caused strawberry anthracnose in Hubei province， was carried out by means of mycelium growth rate method. The results showed that there were big differences in inhibition effects on C. gloeosporioides by various fungicides， among which tebuconazole， the mix of Propiconazol and Prochloraz showed the best effects to strawberry anthracnose with the EC50 value of 0.002 2， 0.005 6 and 0.009 3 mg/L respectively， followed by Flusilazole， sporgon， 60% Pyraclostrobin Carbatene， Score， Cahrio and Bromothalonil. These 10 fungicides were the first choices to control C. gloeosporioides. And Myclobutanil， 50% Stroby WG， dithianon had the least effects with the EC50 value of 12.12， 17.58 and 106.99 mg/L respectively.
Key words： Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Sacc.; toxicity test; fungicide; screening
草莓(Fragaria ananassa Duchesne)有“果中皇后”之稱，營養豐富，經濟價值很高。自1931年首次報道草莓炭疽病以來，已有多國報道該病的發生，其廣泛的傳播性和潛在危害已被廣泛關注[1]。高溫濕潤的氣候條件適宜該病發生。因此，其對7～8月份草莓生產苗繁育造成的損失尤為嚴重。我國于1997年由葉正文等[2]首次發現草莓炭疽病，湖北省該病發生越來越重，嚴重阻礙了草莓產業的發展，尤其是在高溫多濕的育苗季節更為嚴重。目前對該病害的研究主要有葉正文等[2]對抗病品種篩選、龍軍等[3-9]對該病原菌生物學特性的研究等，針對防治該病害的農藥篩選研究很少。作者力求篩選出對草莓膠孢炭疽病病菌毒力大、抑菌效果好的殺菌劑供生產上使用。因此試驗選用13種殺菌劑作為供試藥劑，采用菌絲體生長速率法對草莓膠孢炭疽病病菌進行室內毒力測定，以期篩選出對草莓膠孢炭疽病病菌毒力強的殺菌劑，為防治草莓炭疽病提供參考。
1 材料與方法
1.1 供試菌株
草莓炭疽病病原菌來源于湖北省農業科學院經濟作物研究所分離，并通過分子鑒定保存的炭疽病病原膠孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc][10]，經過單孢純化后獲得供試菌株。
1.2 供試藥劑
經預備試驗篩選出以下幾種藥劑做藥效測定(表1)。
1.3 殺菌劑室內毒力測定
采用殺菌劑室內生長速率法測定[10]。上述藥劑均用無菌水配制成系列濃度梯度的溶液，在無菌操作臺上將不同梯度的藥劑加入到滅過菌的冷卻到40～50 ℃的PDA培養基中，傾入后立即水平方向平穩搖動三角瓶，使藥劑在培養基中均勻分布后倒平板。在每個平板中央接入一塊直徑為0.5 cm的菌苔，以不加藥劑為空白對照。25 ℃恒溫黑暗培養6 d后用“垂直十字交叉法”測量菌落直徑，檢查藥劑的抑菌效果，每處理5皿，重復3次。
將PDA培養基放入121 ℃高壓滅菌20 min。按每個三角瓶分裝60 mL。分裝后放在無菌操作臺上，用移液槍移入被稀釋后的不同濃度的農藥，并搖勻。然后快速將其分別倒入3個培養皿中。每個培養皿倒入20 mL，待其冷卻凝固后在培養皿左上方貼標簽紙標記(預備做農藥抑菌試驗的農藥的編號)，然后用打孔器將供實驗菌打孔，移入培養皿內[4]。然后將培養皿倒置于培養箱中，25 ℃恒溫黑暗培養6 d，觀察并測定抑菌圈直徑。檢查藥劑的抑菌效果，每處理3皿，重復3次。通過十字交叉法對抑菌圈的大小進行測定。
抑菌率=■×100%
將藥劑對菌絲的抑制率轉換成幾率值(y)，藥劑各濃度(mg/L)轉換成對數值(x)，進行線性回歸分析，求出毒力回歸方程和相關系數，最后計算出各藥劑對病菌菌絲生長的抑制中濃度(EC50)。
1.4 數據分析
試驗數據的分析均用SPSS 11.5和Excel 2003完成。
2 結果與分析
2.1 殺菌劑對病原菌EC50的比較
不同藥劑對炭疽病病原菌菌絲生長的抑制中濃度(EC50)見表2。從表2中可以看出，13種藥劑對炭疽病病原菌菌絲的生長速度具有不同程度的抑制作用，抑制效果表現出明顯的差異。
從各藥劑的毒力回歸方程和EC50可以看出，13種藥劑中好力克、丙環·咪鮮胺和施保功3種殺菌劑對病菌的毒力作用最強，EC50值分別為0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L;其次是福星，EC50為0.17 mg/L;施保克EC50為1.11 mg/L，百泰EC50為1.23 mg/L，凱特EC50為1.57 mg/L，世高EC50為1.83 mg/L，凱潤EC50為4.22 mg/L，溴菌腈EC50為4.42 mg/L，相對較低;而腈菌唑、翠貝和二氰蒽醌對病菌的抑制作用差，其中二氰蒽醌的抑制作用最差，EC50值達到106.99 mg/L。
2.2 病原菌對殺菌劑的敏感性比較
回歸方程的斜率越大，表明病菌對該殺菌劑的敏感性越差。殺菌劑按照斜率值(表2)從大到小排序依次為二氰蒽醌、腈菌唑、溴菌清、施�？恕⒋湄�、凱潤、凱特、世高、百泰、福星、施保功、好立克和丙環·咪鮮胺，說明病菌對施保功、好立克和丙環·咪鮮胺最敏感。
3 討論
通過分析各藥劑的毒力回歸方程斜率值與其EC50值，綜合分析認為溴菌清、施�？恕P潤、凱特、世高、百泰、福星、施保功、好立克、丙環·咪鮮胺10種藥劑的抑菌效果較好。其中施�？藢Σ【腅C50值較低，且斜率值較高，成為最具潛力的使用藥劑。其他藥劑也具有很好的應用價值，在生產上可以輪換使用，防止病菌產生耐藥性。
篩選出的10種殺菌劑有著不同的作用方式，其中施�？藶檫溥蝾悮⒕鷦�，主要作用方式是抑制甾醇類生物合成，雖然不具有內吸作用，但具有一定的傳導性能。苯醚甲環唑、丙環唑、氟硅唑、戊唑醇屬于 1H-Benzotriazole 類殺菌劑，其作用機理為影響甾醇類生物合成，使菌體細胞膜功能受到破壞，具有內吸性。吡唑醚菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，來源于天然抗生素，為線粒體呼吸抑制劑，不僅具有廣譜的生物活性，更具有高度的選擇性，對環境安全。室內藥劑篩選的結果雖可以看出藥劑對菌絲具有抑制作用，但由于受很多因素的影響，培養皿內的抑菌活性和在田間使用上的作用效果不一定完全一致，因此還有待作進一步田間的防治效果試驗。
參考文獻：
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