151個精神分裂癥家系中多巴胺D3受體基因Ser9Gly多態的

151個精神分裂癥家系中多巴胺D3受體基因Ser9Gly多態的

　　151個精神分裂癥家系中多巴胺D3受體基因Ser9Gly多態的

　�。壅� 要］目的:探討多巴胺D3受體基因(DRD3)第一外顯子Ser9Gly多態性與精神分裂癥的關系。方法:采集151個家系，每家有2名或2名以上符合ICD-10精神分裂癥診斷標準的患病同胞父母存活且父母中至多只有一方有精神分裂癥患病史。對DRD3基因的Ser9Gly多態性進行檢測。結果:(1)總體而言，DRD3基因的Ser9Gly等位基因頻度和基因型頻度在父母組、非患病同胞組和患病同胞組之間差異無顯著性，在精神分裂癥不同亞型之間基因型頻度和等位基因頻度的分布差異也沒有統計學意義。(2)傳遞不平衡檢驗(TDT)發現在患病同胞中存在傳遞不平衡(χ2=7.76，P=0.0053，OR=1.70，95%置信區間為1.15～2.52)。(3)基因型與臨床特征的相關分析顯示，具有Ser9等位基因的患病同胞較多地出現陰性癥狀。結論：DRD3基因的Ser9Gly多態與家族性精神分裂癥相關聯。研究支持DRD3作為精神分裂癥的候選基因之一。

　　［關鍵詞］精神分裂癥/遺傳學；受體，多巴胺；多態現象；外顯子

　�。壑袌D分類號］R749.3  ［文獻標識碼］A

　�。畚恼戮幪枺�1000-1530（2000）05-0455-03

　　DisequilibriumtransmissionofSer9GlypolymorphismofDopamineD3receptorgenein151schizophreniafamilies

　　ZHOURu-Lun HUXian-Zhang ZHOUChao-Feng HANYong-Hua CHENChang-Hui WANGYu-Feng SHENYu-Cun

　�。≒ekingUniversityInstituteofMentalHealth,Beijing 100083,China）

　　ABSTRACT Objective:ToinvestigatetheassociationbetweenSer9GlypolymorphismofdopamineD3receptorgene(DRD3)andschizophrenia.Methods:TheSer9GlypolymorphismofDRD3wastestedin151ChineseHanspedigreeseachofwhichhadtwoormoreaffectedschizophreniasiblingswhofulfilledtheICD-10criteriawiththeparentsaliveandatmostonlyoneofwhoseparentsmayhavethehistoryofsufferingschizophrenia.Results:(1)Totally,thedistributionsofallelesorgenotypesofDRD3Ser9Glypolymorphismarenotsignificantlydifferentbetweenthegroupsof parents,unaffected-siblingsandaffected-siblings,andbetweenthesub-typesofschizophrenia.(2)Thetransmissiondisequilibriumtest(TDT)showsthetransmissiondisequilibriuminaffected-siblings(χ2=7.76,P=0.005 3,OR=1.70,95%IC:1.15-2.52).（3)Thecorrelationanalysiswastakenbetweengenotypesandclinicalstatus． TheresultsshowthatschizophreniasiblingswithSer9alleleareapttohavenegativesymptoms.Conclusion:TheresultsshowthattheremayexistassociationbetweenDRD3andschizophrenia.ThisresearchsupportsthatDRD3maybeoneofthecandidategenesofschizophrenia.

　　KEYWORDS Schizophrenia/genet;Receptors,dopamine;Polymorphism(genetics);Exons

　　（JBeijingMedUniv,2000,32:455-457)

　　多巴胺系統是精神分裂癥生物學背景中引起最多關注的因素。近年來，對二者關系的基因水平研究呈現相互矛盾的結果，其中陰性結果居多，因此，對多巴胺假說尚需進一步探索。綜合大量的研究結果，有理由認為，多巴胺系統在精神分裂癥中具有難以替代的重要作用：(1)大多數抗精神病藥通過多巴胺受體發揮作用是一個不爭的事實；(2)動物實驗中提高多巴胺水平可以產生類似精神分裂樣癥狀，可重復性比較穩定；(3)盡管基因水平研究中大多數屬于陰性結果，但有若干陽性報道來自于大樣本、亞型分類的研究；(4)有相當多的陰性報道中，多巴胺受體基因與癥狀群或癥狀呈明顯相關。因而利用大規模樣本對多巴胺系統進行深入細致地研究對進一步認識多巴胺系統在精神分裂癥中的作用具有十分重要的意義。

　　精神分裂癥與多巴胺受體關系的研究始于70年代中期。作者在1995年對多巴胺D2受體基因(DRD2)第七外顯子Ser311Cys(習慣表示法，意為第311位密碼子由絲氨酸變為半胱氨酸)多態與精神分裂癥的關系進行了研究，發現該多態與精神分裂癥家族史和發病年齡相關［1］。繼多巴胺D2受體之后，研究發現經典和非經典抗精神病藥都可以提高多巴胺D3受體基因的表達水平［2］。有鑒于此，為進一步驗證精神分裂癥的多巴胺假說，我們利用多年來積累的較大規模的樣本對DRD3基因第一外顯子Ser9Gly(第9密碼子由絲氨酸變為甘氨酸)多態性進行了分析。

　　1 材料與方法

　　1.1 研究對象

　　1.1.1 家系的來源 家系的收集從1991年開始到1998年結束。共收集來自北京、新鄉、天津、石家莊、四平、長春、吉林、丹東、哈爾濱、開原等地的精神分裂癥核心家系(每家包括兩個或兩個以上精神分裂癥患病同胞和患病同胞的父母)。按ICD-10精神分裂癥診斷標準，通過研究組臨床專家和患病家庭成員面談進行疾病診斷的確認和合格家系的篩選。共獲得家系151個，633人。將151個家系的成員分成3組：父母組(308人)；患病同胞組(303人)；非患病同胞組(22人)。所有樣本均為漢族。

　　1.1.2 臨床資料的收集 家系入組后由經過培訓的研究人員對合格家系中的精神分裂癥患者進行“遺傳學研究診斷會談表(DIGS)”檢查，同時用“遺傳學研究家屬會談表(FIGS)”對知情人進行定式調查(DIGS和FIGS由哈佛大學提供，北京大學精神衛生研究所翻譯并測試，雙方共同組織了相關的人員培訓)。

　　1.2 實驗方法

　　1.2.1 標本的采集與處理 對合格樣本以書面形式獲得知情同意后，抽取外周靜脈血10ml，4℃保存，兩周內常規方法提取DNA。

　　1.2.2 基因型檢測 聚合酶鏈式反應（PCR）：設計上游引物5′-ACAGGAAGCCCCTTGGCATC-3′和下游引物5′-CAGTAGGAGAGGGCATAGTAGGCAT-3′。該序列所擴增的產物長度為148 bp,中間包擴一個對應于內切酶MscⅠ的多態性切點(MscⅠ的識別順序是TGGCCA)，由此形成限制性片段長度多態(RFLP)。PCR總反應體積25μl，循環條件為94℃，30s；56℃，90s；72℃，1min。反應在雙槽PTC-200型PCR儀（MJResearch,USA）上進行。以上循環針對0.1μg基因組DNA進行35輪，進入循環前于95℃預變性5min，出循環后于72℃延長反應10min。限制性內切酶消化：PCR產物用MscⅠ酶切。通過2%(20g.L－1)瓊脂糖電泳分離鑒定基因型，以50 bpDNAladder(Gibco-BRL)作分子量標準品。如果為Ser9，切點陰性，表現為148 bp片段，本文中用A1表示該等位基因；如果為Gly9，切點陽性，表現為94 bp+64 bp兩個片段，本文中用A2表示該等位基因。

　　1.2.3 統計分析 采用統計分析軟件包(statisticalpackagesforsocialsciences,release7,SPSSCorp.USA)及EpiINFOv6.0c進行數據管理和統計分析。

　　2 結果

　　在家系中，用χ2檢驗對DRD3基因型頻度和等位基因頻度進行比較，基因型分布在父母和患病同胞之間(χ2=1.87,P=0.39)以及父母和非患病同胞之間(χ2=4.03,P=0.13)差異無顯著性。等位基因分布在父母和患病同胞之間(χ2=0.2,P=0.66)以及父母和非患病同胞之間(χ2=0.23,P=0.63)差異亦無顯著性。

　　按文獻［3］報道的方法，在151個家系中，根據父母基因型在同胞中的傳遞情況，進行傳遞不平衡檢驗(TDT)。發現在患病同胞中存在傳遞不平衡性(χ2=7.76，P=0.005 3，OR=1.70，95%置信區間1.15～2.52)。編碼Gly9的等位基因較多地傳遞給了患病同胞。說明以家族成員作為對照時，DRD3基因Ser9Gly多態與精神分裂癥明顯相關。

　　設A1/A1=1，A1/A2=1.5，A2/A2=2，對基因型進行變量變換，分別以起病年齡、病程、臨床癥狀分、陽性及陰性癥狀量表總分和各分量表總分作為對應變量，以Pearson法進行二元變量的相關分析。結果發現DRD3基因型與陰性癥狀量表綜合評定總分呈負相關(r=－0.148,P=0.046)。

　　3 討論

　　經典和非經典抗精神病藥均與DRD3有較強的結合力，而且DRD3在中腦邊緣系統的表達量最高，部分研究顯示，經典與非經典抗精神病藥可以上調DRD3，而對DRD2無上調作用［2］。因此,DRD3被認為對精神分裂癥的治療和病因學研究具有重要意義。DRD3基因繼DRD2基因之后成為備受關注的精神分裂癥候選功能基因。

　　一個對24項散發病例-對照研究的薈萃分析(含精神分裂癥2619名，正常對照2517名)發現，按地域和種族分組后，非洲人和高加索人中的精神分裂癥的A1純合子基因型顯著升高，提示DRD3基因Ser9Gly多態性在上述人群中對精神分裂癥的易感性可能具有影響［4］。另外，英國和法國的研究小組各自獨立地發現，DRD3基因第一外顯子中Ser9Gly多態與精神分裂癥相關(英國樣本：P=0.005,法國樣本：P=0.008)［5］。然而，在一些小樣本散發病例-對照研究沒有發現DRD3基因Ser9Gly多態性與精神分裂癥相關［6，7］,Wiese等［8］在4個冰島家系中的研究不支持DRD3與精神分裂癥的連鎖(LOD=－2.50)。但他們不排除DRD3的表達調節基因參與精神分裂癥病因，或在其它家系中存在連鎖以及以群體為基礎的關聯研究出現陽性結果的可能性。

　　由于精神分裂癥可能存在復雜的異質性，因而大樣本量、亞型分類和嚴格質量控制對于研究的可靠性非常重要。同時，利用不同種族的獨立樣本對同一個假說的驗證是獲得正確結論的必要前提。本文分析了151個家系，屬于非高加索人群中規模較大的研究。研究采用傳遞不平衡性檢驗(TDT)對結果進行分析，避開了精神分裂癥遺傳方式等諸多不清楚因素的困擾。發現在患病同胞中存在明顯的傳遞不平衡性(χ2=7.76， P=0.005 3，OR=1.70，95%置信區間1.15～2.52)。較有力地支持了DRD3基因作為精神分裂癥候選基因之一的假說，同時也提示，多巴胺系統與精神分裂癥存在復雜的聯系。進一步的研究應考慮多種多巴胺系統相關基因的同步研究，還應當更加量化地納入環境因素。

　　至于DRD3多態基因型與精神分裂癥癥狀的關系，本文發現Ser9/Ser9純合子的精神分裂癥患病同胞比較容易表現出陰性癥狀，而該基因型與幻覺妄想、情感障礙、運動障礙、瓦解性行為等無相關。分析時由于人為進行了變量變換，只作參考，結果提示精神分裂癥并非一個單純性疾病，而更傾向于一個復雜的綜合征，針對癥狀或癥狀群的研究是一個有前景的深入方向。

　　參考文獻

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　　7，YangL,LiT,WieseC,etal.NoassociationbetweenschizophreniaandhomozygosityattheD3dopaminereceptorgene［J］.AmJMedGenet,1993,48:83-86

　　8，WieseC,LannfeltL,KristbjarnarsonH,etal.NoevidenceoflinkagebetweenreceptorgenelocusinIcelandicpedigrees［J］.PsychiatryRes,1993,46:69-78

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