中藥預(yù)防流感的作用與黏膜免疫相關(guān)性探討
【摘要】目的探討中藥在預(yù)防流感中的作用和黏膜免疫的相關(guān)性。方法選用BALB/c小鼠120只，分成A、B兩組，A組分為六小組，每組10只，分別為是空白組(使用生理鹽水)、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風(fēng)散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。連續(xù)給藥12d后處死小鼠，分離血清，收集每只小鼠的鼻咽沖洗液、腸道沖洗液以及支氣管肺泡灌洗液，然后使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測其免疫球蛋白A(IgA)的含量，空白組的小鼠稱體重和肺重，測定肺指數(shù)。B組同樣分為6組，每組10只小鼠，對應(yīng)每組分別是病毒對照組、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風(fēng)散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。給藥1周后對照組小鼠感染15LD50流感病毒，使用滴鼻感染的方式，感染后連續(xù)給藥5d，1次/d，感染5d后處死小鼠，同樣每只小鼠稱體重并測定肺指數(shù)，分離血清，收集每只小鼠的鼻咽沖洗液、腸道沖洗液以及支氣管肺泡灌洗液，然后使用ELISA檢測其IgA的含量。結(jié)果在對流感病毒所感染的小鼠產(chǎn)生的抑制作用方面，銀翹散制劑組、利巴韋林組與病毒組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在對正常小鼠黏膜免疫產(chǎn)生的影響方面，銀翹散制劑組小鼠血清中IgA含量明顯較空白對照組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);利巴韋林組小鼠支氣管-肺泡內(nèi)sIgA較空白組下降明顯(P<0.05)。在對流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影響方面，利巴韋林組小鼠血清中IgA含量明顯較對照對要高(P<0.05)。結(jié)論中藥預(yù)防流感和黏膜免疫具有相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】流感;黏膜免疫;免疫球蛋白A;中藥
流感是有流感病毒引起的一種呼吸道傳染病，病毒首先接觸呼吸道的黏膜，這樣黏膜就成了阻止病毒入侵的第一道防線，黏膜內(nèi)的免疫細(xì)胞分泌的IgA能與病毒結(jié)合，阻止病毒入侵。中醫(yī)藥在預(yù)防流感上具有悠久的歷史，其給藥方式主要有口服、佩戴和煙熏等[1]。本研究旨在利用小鼠模型來探討重要預(yù)防流感的作用和黏膜免疫的一些相關(guān)性。
1、材料與方法
1.1實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1實(shí)驗(yàn)動物6周大雌性BALB/c小鼠120只，SPF級，購于上海市實(shí)驗(yàn)動物中心。
1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑和器材乙醚、小鼠ELISA試劑盒、利巴韋林;醫(yī)用的超聲霧化器、滅菌鍋、醫(yī)用的凈化工作臺、電子分析天平純水儀、酶標(biāo)儀、低溫冰箱等。
1.1.3實(shí)驗(yàn)所用藥物銀翹散制劑、冰香散、玉屏風(fēng)散制劑、利巴韋林。
1.1.4實(shí)驗(yàn)所用病毒株甲型流感病毒(H1N1)鼠肺的適應(yīng)株是購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，本研究所病毒室冷凍保存。
1.2實(shí)驗(yàn)方法A組：60只小鼠隨機(jī)分成六組，每組10只，分別為空白組(使用生理鹽水)、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風(fēng)散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。針對不同的預(yù)防方藥使用口服、滴鼻和霧化吸入的方式。給藥1次/d，共計(jì)12d。給藥的劑量分別為銀翹散制劑口服40g/kg，冰香散滴鼻組0.03g/kg，玉屏風(fēng)散制劑組60g/kg，冰香散霧化組0.6g/kg，利巴韋林組口服100mg/kg。給藥12d后處死小鼠，收集血清、鼻咽沖洗液、支氣管肺泡沖洗液以及腸道沖洗液后ELISA檢測IgA的含量。空白組小鼠稱體重、肺重，測定肺指數(shù)。B組：給藥量與A組相同。對照組小鼠在乙醚麻醉后采用滴鼻感染的方式感染15LD50病毒液，每只小鼠約0.05ml，在給藥1周后攻擊感染，感染5d后處死，稱體重和肺重，測定肺指數(shù)。收集血清、鼻咽沖洗液、支氣管肺泡沖洗液以及腸道沖洗液后ELISA檢測IgA的含量。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。顯著性檢驗(yàn)取α=0.05。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2、結(jié)果
2.1不同中藥對流感病毒所感染的小鼠產(chǎn)生的抑制作用通過實(shí)驗(yàn)，空白組小鼠的肺重為(0.15±0.02)mg，肺重指數(shù)(0.72±0.06)g/g，肺指數(shù)的抑制率0;病毒對照組小鼠的肺重為(0.23±0.04)mg，肺重指數(shù)(1.62±0.36)g/g，肺指數(shù)的抑制率0;銀翹散制劑組的肺重為(0.20±0.05)mg，肺重指數(shù)(1.04±0.43)g/g，肺指數(shù)的抑制率35.45%;利巴韋林組的肺重為(0.18±0.04)mg，肺重指數(shù)(1.09±0.41)g/g，肺指數(shù)的抑制率33.10%。統(tǒng)計(jì)可知，病毒對照組與空白組比較發(fā)現(xiàn)小鼠肺重明顯增加，肺指數(shù)明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀翹散制劑、利巴韋林作用后小鼠肺指數(shù)的`抑制率在25.48%～41.62%。銀翹散制劑組、利巴韋林組與病毒對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.2不同中藥對正常小鼠黏膜免疫產(chǎn)生的影響研究結(jié)果顯示，連續(xù)12d給藥后，空白組血清IgA為(1.81±0.35)g/L，鼻煙sIgA為(0.86±0.47)g/L，支氣管-肺泡sIgA為(13.12±2.48)g/L，腸道sIgA為(24.89±20.79)g/L;銀翹散制劑組血清IgA為(5.58±1.52)g/L，鼻煙sIgA為(0.91±0.85)g/L，支氣管-肺泡sIgA為(13.72±2.78)g/L，腸道sIgA為(38.59±28.48)g/L;利巴韋林組血清IgA為(2.31±1.15)g/L，鼻煙sIgA為(0.53±0.25)g/L，支氣管-肺泡sIgA為(7.45±1.69)g/L，腸道sIgA為(25.15±20.35)g/L。
銀翹散制劑組小鼠血清中IgA含量明顯較空白組要高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，由此可知銀翹散制劑給藥方式都能提升小鼠的免疫力。利巴韋林組小鼠支氣管-肺泡內(nèi)sIgA較空白組下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.3不同預(yù)防中藥對流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影響病毒對照組血清sIgA為(1.75±0.43)g/L，鼻煙sIgA(0.35±0.15)g/L，支氣管肺泡sIgA為(8.15±1.71)g/L，腸道sIgA為(90.25±47.10)g/L;銀翹散制劑組血清sIgA為(1.93±0.35)g/L，鼻煙sIgA(0.37±0.25)g/L，支氣管肺泡sIgA為(8.98±1.21)g/L，腸道sIgA為(89.89±32.10)g/L;利巴韋林組血清sIgA為(1.11±0.37)g/L，鼻煙sIgA(0.31±0.15)g/L，支氣管肺泡sIgA為(4.41±1.21)g/L，腸道sIgA為(72.35±23.89)g/L。結(jié)果顯示利巴韋林組小鼠血清中IgA含量明顯較病毒對照組要高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。利巴韋林則顯著降低了支氣管-肺泡內(nèi)sIgA的分泌。
3、討論
病毒入侵時(shí)，機(jī)體的第一道屏障是黏膜，而黏膜免疫反應(yīng)中其主要作用的就是IgA。流感病毒入侵機(jī)體往往是通過呼吸道黏膜，因此，呼吸道黏膜在抵抗流感的過程中起著舉足輕重的作用，呼吸道黏膜分泌的分泌型IgA-sIgA的多少決定了機(jī)體對流感的抵抗力大小[2]。
研究表明中藥對流感的預(yù)防有著很好的療效[3]。本研究結(jié)果表明銀翹散制劑、冰香散、玉屏風(fēng)散、冰香散作用后小鼠的肺指數(shù)明顯改善，都能夠很好的預(yù)防流感，并在一定程度上減輕感染鼠肺后的病變程度。利巴韋林給藥能夠抑制黏膜分泌IgA，不宜作為流感預(yù)防用藥�？诜�、佩戴和煙熏三種中藥給藥的方式都可以作用于消化道和呼吸道黏膜，使黏膜分泌IgA。因此，中藥預(yù)防流感的作用和黏膜免疫具有一定的相關(guān)性。
參考文獻(xiàn)：
[1]孫翠娥，楊篤然，丁正琪，等.中草藥煙熏對空氣消毒及預(yù)防呼吸道傳染病作用的研究.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，7(12)：1884-1885.
[2]徐培平，丁偉，趙昉，等.中藥預(yù)防流感作用與黏膜免疫相關(guān)性研究.中國免疫學(xué)雜志，2012，28(11)：992-998.
[3]蘇惠萍，沈薔，武維屏，等.中醫(yī)預(yù)防方案干預(yù)社區(qū)流感的隨機(jī)對照研究.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33(10)：690-694.
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