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淺析微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用
摘要：新生兒溶血病一般特指母嬰血型不合而引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾�。╤aemolytic disease of the newborn），簡(jiǎn)稱HDN。在我國(guó)，因ABO血型不合引起的新生兒溶血病較為常見，Rh血型不合引起的新生兒溶血病次之。新生兒溶血病嚴(yán)重時(shí)，可出現(xiàn)核黃疸，導(dǎo)致智力發(fā)育不全、腦癱等后遺癥。新生兒溶血病是嚴(yán)重影響新生兒健康的疾病。采用微柱凝膠技術(shù)對(duì)新生兒溶血病診斷的三項(xiàng)試驗(yàn)(直接抗球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn))的快速檢出，更有利于臨床及時(shí)對(duì)患兒的診斷和治療。
關(guān)鍵詞： 微柱凝膠技術(shù) 新生兒溶血病 血清學(xué)檢測(cè)
微柱凝膠技術(shù)（microcolumn get Immunoassay）是目前國(guó)內(nèi)外血型血清學(xué)檢查方法之一。其設(shè)計(jì)理論先進(jìn)，具有操作簡(jiǎn)單迅速、標(biāo)本用量少、結(jié)果易判斷、敏感性高和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
1 材料與方法
1.1 試劑與儀器 試劑：DianaGeL coombs卡（每卡含8個(gè)微柱孔管），每個(gè)微柱孔管含低離子強(qiáng)度緩沖液（LISS）浸泡中的微粒篩，加上多價(jià)抗人球蛋白（兔多克隆抗IG和單克隆抗C3d克隆12011.D10）。
標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞：0.8%O型篩查細(xì)胞（）批號(hào)：8004801 801001 801101 801201 900201 900101 900301 900401。0.8%A型細(xì)胞0.8%B型細(xì)胞 批號(hào)：8001801 8001901 8007801 8002501 900201 901001 900501 900601 901001。
Diasnvstic Grifols S.A卡：用于ABO、Rh血型、直接抗球蛋白試驗(yàn)，批號(hào)：50040101 60010101 80010201 80010301 80030101 80060201。
DianaGeL Coombs卡（抗人球卡）批號(hào)：80080101 80420101 80750101 81180101 81380101 81470101。
儀器：專用的Diana Fuag 離心機(jī)和Diana孵育器。
以上試劑和儀器均為GRIFULS公司產(chǎn)品，由沈陽麥迪卡爾有限公司提供。
1.2 樣本來源 2007年1月-2009年5月住在我院新生兒科患兒（母親是O型，患兒是A型或B型）出生后1-3天皮膚鞏膜黃染，血紅蛋白降低，血清膽紅素高于正常值，對(duì)患兒采集EDTA抗凝血3毫升共541份標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)室對(duì)所送標(biāo)本必須在接到后24小內(nèi)檢查完畢。
1.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1 標(biāo)本處理 取患兒EDTA抗凝血3毫升，將血漿分離，剩余紅細(xì)胞經(jīng)0.9%生理鹽水洗滌4遍后，取壓積紅細(xì)胞5微升加入Diana稀釋液2（低離子介質(zhì)液）500微升中制成1%紅細(xì)胞懸液。剩余的壓積紅細(xì)胞加入和壓積紅細(xì)胞一倍的生理鹽水，經(jīng)56℃水�。ㄊ帜迷嚬懿粩嘣谒休p輕震動(dòng)10分鐘），拿出保溫離心提取粉紅色上清（放散液）備用。
1.3.2 取Dignostic Grifols.SA微柱凝膠卡一張，各孔加入患兒1%紅細(xì)胞懸液50微升，放入Diana Fuge 離心機(jī)離心10分鐘，觀察結(jié)果。
1.3.3 取Diana GeL coombs卡一張，拿出6孔分別標(biāo)識(shí)ABO、ABO，按標(biāo)識(shí)的血型分別在各孔中加入0.8%A型紅細(xì)胞、0.8%B型紅細(xì)胞和0.8%O型紅細(xì)胞（等量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ O型紅細(xì)胞混合液）50微升。前3孔各加入患兒血漿50微升(游離抗體試驗(yàn))，后3孔各加入患兒紅細(xì)胞放散液50微升（抗體放散試驗(yàn)）。置Diana孵育器15分鐘后，放Diana Fuge專用離心機(jī)離心10分鐘，按照微柱凝膠卡式法的三項(xiàng)試驗(yàn)說明書判讀結(jié)果。
1.4實(shí)驗(yàn)室新生兒溶血病診斷標(biāo)準(zhǔn) 三項(xiàng)試驗(yàn)同時(shí)陽性或放散試驗(yàn)陽性可確診為新生兒溶血病。若直抗試驗(yàn)和游離試驗(yàn)1項(xiàng)或2項(xiàng)陽性者，可判斷為疑似新生兒溶血病。
2 結(jié)果
3 討論
目前，在我國(guó)診斷新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)室檢查主要是三項(xiàng)試驗(yàn)（直接抗球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)、放散試驗(yàn)），直接抗球蛋白試驗(yàn)主要檢測(cè)新生兒紅細(xì)胞是否被來自母親IgG抗A（B）所致敏；游離抗體試驗(yàn)是患兒血清的IgG抗A（B）來自母親，如果新生兒血清中發(fā)現(xiàn)與其紅細(xì)胞不配合的IgG抗A(B)時(shí)，表明嬰兒體內(nèi)有抗體，可能受害；放散試驗(yàn)采用的是試管抗球蛋白技術(shù)和微柱凝膠技術(shù)，用放散液與標(biāo)準(zhǔn)ABO型紅細(xì)胞反應(yīng)，（與O型紅細(xì)胞反應(yīng)視做陰性對(duì)照）均無凝集者，表明未查出抗體，A型新生兒紅細(xì)胞放散液只與標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞凝集，表明放散液檢出抗-A，而B型新生兒紅細(xì)胞放散液只與標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞凝集，表明放散液檢出抗-B，而A型新生兒紅細(xì)胞放散液與標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞凝集或B型新生兒紅細(xì)胞放散液與標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞凝集,表明放散液中檢出抗-A，B。我們采用微柱凝膠技術(shù)對(duì)我院541例母嬰血型不合且有嚴(yán)重的新生兒黃疸或高膽紅素血癥患兒的血標(biāo)本進(jìn)行了三項(xiàng)試驗(yàn)，結(jié)果表明：ABO母嬰血型不合新生兒溶血�。℉DN）171例，其中OA115例，OB56例。ABO溶血病因紅細(xì)胞的抗體結(jié)合較少，直接抗球蛋白試驗(yàn)常為陰性或弱陽性，血清游離抗體陽性，抗體釋放試驗(yàn)陽性。Rh溶血病直接抗球蛋白試驗(yàn)強(qiáng)陽性，游離抗體強(qiáng)陽性，抗體釋放試驗(yàn)強(qiáng)陽性。我院新生兒科對(duì)溶血
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