血型鑒定和交叉配血技術的進展

血型鑒定和交叉配血技術的進展

　　醫學界在輸血治療手段出現之初，曾發生過無數血的教訓。1492年，首例輸血由于使用的方法很原始，沒有成功病人死亡;1667年法國國王御醫Jean用羊血治療精神病患者，償試將動物血輸給人導致死亡，這一嚴重事故使以后150多年沒人再敢嘗試輸血治療。1818年，英國產科醫生James Blundell首次用人血輸治患者，取得一定效果。1900年奧地利維也納大學科學家Karl Landsteiner發現ABO血型及Rh血型系統，增加了人類對血型系統的認識。直到1907年，Hektoen建議通過獻血者和受血者之間的交叉配血才提高了輸血的安全性，Reuben Ottenberg完成了首例使用血型和交叉配血的輸血實驗，開啟了現代輸血醫學的新紀元職稱論文。

　　輸血前試驗包括血型鑒定、抗體篩選和交叉配血，其中交叉配血是關鍵[1]。交叉配血是在血型鑒定的基礎上，進一步證實血型測定是否有誤，以及受血者和供血者之間是否存在血型不合的抗原抗體反應，以保證受血者的輸血安全。這一試驗對于未進行紅細胞血型抗體篩選的患者尤為重要，紅細胞血型抗體有完全抗體和不完全抗體。完全抗體為分子量較大的IgM抗體，可在鹽水介質的交叉配血中與相應的紅細胞發生凝集反應;不完全抗體指ABO系統以外的其他血型抗體，為分子量較小的IgG抗體，在鹽水介質中雖然能夠結合紅細胞上的抗原，但不能使紅細胞凝集，必須通過特定的方法使致敏紅細胞發生凝集。根據紅細胞血型抗體的特性，血型鑒定和交叉配血方法在不斷產生，其檢測技術也在不斷發展。

　　1、鹽水交叉配血法

　　鹽水法配血時，用生理鹽水配制紅細胞懸液，紅細胞膜上由于唾液酸中的羧基離子而帶負電，此負電荷形成的排斥力 (Zeta 電位) 使單個紅細胞之間保持一定的距離，當其與血清相配合時，血清中的大分子完全抗體，能在相應紅細胞之間搭橋，使其發生凝集，通過觀察凝集或溶血來判斷配血結果。鹽水法是交叉配血的必做項目，能簡便快速的檢測IgM型抗體，發現血型是否錯誤或判斷是否發生溶血，但不能檢出不完全IgG型抗體[2,3]，不能有效的防止免疫性溶血性和非溶血性輸血反應的發生，因此單用鹽水法配血存在一定的危險性。

　　2、抗人球蛋白交叉配血法(AGT)

　　1908年Carlo Moreschi利用分子搭橋的原理記錄了抗人球蛋白試驗。此法又稱Coombs試驗，分為檢測紅細胞表面有無不完全抗體的直接抗人球蛋白試驗和檢測血清中有無不完全抗體的間接抗人球蛋白試驗，是最經典、最早用于檢查不完全抗體的方法，是目前交叉配血的金標準。本法靈敏，但是傳統的抗人球方法，操作繁雜、反應時間較長、結果不易判斷和統一、試劑效期短，不能滿足輸血檢測及時準確的要求，因而未被國內廣泛采用。

　　3、酶介質交叉配血法

　　酶法是采用蛋白水解酶(如菠蘿酶、木瓜酶等)進行配血的方法。酶可以破壞紅細胞表面帶電荷的唾液酸，從而降低紅細胞表面電荷，使其得以靠攏，因而能使具有特異性的不完全抗體與經酶處理的具有相應抗原紅細胞發生凝集。此法的特點是操作較為簡便，經濟，但較難質控，時間長，實驗重復性較差，而且酶可能部分的改變紅細胞結構，使某些隱蔽的抗原得以暴露，容易產生假陽性;有的抗原經過消化后便消失活力，真陽性變成假陰性。因此，此法也有一定的局限性。

　　4、凝聚胺交叉配血法(MPT)

　　1980年Palezari和Jiang首先將凝聚胺技術應用在血庫作業上。凝聚胺交叉配血，是利用低離子介質減少紅細胞周圍的陽離子云，以促進紅細胞與血清或血漿中抗體結合。聚凝膠分子是帶有高價陽離子多聚季鍍鹽，溶解后帶有很多正電荷可以中和紅細胞表面負電荷，有利于紅細胞凝集，低離子強度溶液也能減低紅細胞的Zeta電位，可進一步增加抗原抗體間的吸引力。當血清中存在IgM或IgG類血型抗體時，與紅細胞發生緊密結合，此時加入枸櫞酸鹽解聚液以消除聚凝膠的正電荷，使IgM或IgG類血型抗體與紅細胞產生凝集不會散開;如果血清中不存在IgM或IgG類血型抗體，加入解聚液可使非特異性凝集消失。此法可以檢出IgM與IgG兩種性質的抗體，能發現可引起溶血性輸血反應的幾乎所有完全與不完全抗體。據報道，凝聚胺法應用于血型鑒定、交叉配血、不完全抗體的篩選，其靈敏度及特異性遠高于其他介質的1-250倍，尤其是Rh系統抗體，但對IgG抗-AB抗體的檢出能力較低[4，5，6]。此法操作簡便、快速，在一些基層醫院均已廣泛使用。聚凝胺法雖然簡便快速，但有可能漏檢重要的Kell血型系統[7]及血液中低效價的不規則抗體[8]，而且易受到溫度、氣候、臨床藥物、試劑及操作因素的干擾，而使交叉配血出現一些異常結果[9]。

　　5、微柱凝膠交叉配血法(MGT)

　　又稱微管(板)凝膠抗球蛋白試驗。1988年發明的微柱凝膠配血法使抗人球蛋白應用于輸血常規檢測成為現實，它保持了傳統抗球蛋白試驗的準確性，而且方法簡單，易于批量操作[10]，是新發展的一項免疫學檢測技術。此法可在全自動血型分析儀上進行，成為國際安全輸血檢查的推薦方法，目前國外已廣泛應用[11]。

　　微柱凝膠法是凝膠過濾技術和抗原抗體反應的結合，在微量柱中充滿特制的凝膠介質或細小的玻璃珠介質，介質之間的間隙只能使單個紅細胞變形通過，起到類似細胞篩的作用。紅細胞與相應抗體發生凝聚反應，經離心后不能完全到達柱的底部，而呈現陽性，全部沉到底部者為陰性。微柱依據血清反應特點和試劑不同分為不含特異性抗體的中性柱、含特異性抗體的特異性柱、用于檢測IgG類不完全抗體和交叉配血的抗球蛋白柱。此法基本原理雖然與抗人球蛋白法相同，但一般認為抗人球蛋白更為可靠，而微柱凝膠法有發生漏檢的可能。這是因為微柱凝膠法需要在凝膠內離心，少量微弱凝集的紅細胞在離心外力的作用下可能會散開，或者由于具有易變性的紅細胞在通過凝膠孔時變形通過，從而使微弱陽性凝集漏檢。與手工凝聚胺MPT法相比，微柱法靈敏度高，能捕捉到十分微弱的抗原抗體反應因而結果更準確，交叉配血時其靈敏度較MPT法高約1-5個滴度[12]。微柱凝膠法具有操作簡便、結果穩定、重復性好、標本用量少且結果可保存等優點，試驗時增加了孵育步驟，也減少了冷凝集對實驗結果的影響。但有文獻[6]報道，微柱凝膠法對致敏紅細胞和IgG抗-AB血清的檢出能力低于抗人球蛋白法和凝聚胺法，對IgG抗-D血清的檢出能力高于抗人球蛋白法和凝聚胺法;且紅細胞懸液濃度過高時因離心力不足或離心時間過短、血清中含纖維蛋白出現細胞凝塊或血液標本被細菌污染、血漿中的蛋白質(包括IG和補體)非特異性的吸附到患者的紅細胞表面而發生非特異性凝集反應[13]。

　　6、現狀及措施

　　隨著臨床輸血技術的快速發展，血型鑒定和交叉配血方法不斷的更新和完善，很好的保證了病人的輸血安全。但在一些基層醫院由于信息溝通不夠，技術還很原始，血型鑒定和交叉配血方法仍停留在鹽水法。由于鹽水配血法只能檢測出不相合的完全抗體，因此除鹽水法外，還需要應用其它的配血方法來檢測是否存在不完成抗體，以避免不完全抗體造成的輸血反應。由于傳統抗人球蛋白法、酶法本身的局限以及微柱凝膠法儀器昂貴、試劑成本高，目前大多數的基層醫院，在未能常規開展紅細胞不完全抗體篩查情況下，只能采用鹽水法加凝聚胺配血法來進行輸血前配血試驗。

　　段慧玲等[14]報道，幾種交叉配血方法的靈敏度依次為：微柱凝膠法>凝聚胺法>鹽水法。目前，國外基本采用微柱凝膠法，國內也正在普及。何子毅[15]、羅志[16]的研究表明，微柱凝膠法、抗人球蛋白法和凝聚胺法用于交叉配血檢測IgG型抗體，如果超出其最低檢測限，均存在陽性漏檢的現象。因此我們建議在日常交叉配血工作中，采用多種方法同時做交叉配血試驗，以防止供受血者血液中存在的效價較低、或效價較低、親合力也較低的IgG抗體漏檢。此外，有些交叉配血試驗，由于受到過高量的球蛋白的影響，試驗結果也可出現假陽性，此時應對結果做進一步鑒定，以確保交叉配血結果的準確性。

　　參考文獻

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　　[16]羅志,李聚林,孔慶芳等.4種交叉配血方法的試驗效果比較[J],中國輸血雜志,2009, 22(1):36-37

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