龍血竭中龍血素A在大鼠體內的藥動學研究

龍血竭中龍血素A在大鼠體內的藥動學研究

【摘要】  目的　考察龍血竭中龍血素A在大鼠體內的藥動學行為。方法 按100 g大鼠給予龍血竭250 mg灌胃給藥，測定不同時間點的血藥濃度，并以3P97軟件計算其藥動學參數。結果 龍血素A 的Ka為(1?46±0.19) h-1，t1/2(Ka)為(0.48±0.06) h，t1/2(K)為(2.59±0.67) h，tmax為(2.00±0.55) h，Cmax為(1.13±0.24) μg·mL-1，AUC為(2.84±0.68) μg·h·mL-1。結論 龍血素A在大鼠體內符合線性動力學一室開放模型，吸收較快。

【關鍵詞】  龍血竭;龍血素A;高效液相色譜法;大鼠;藥動學

　Abstract:ObjectiveTo study on pharmacokinetics of loureirin A in rats.Methods The blood samples were collected at a series of time points after an oral administration of Dragon′s blood to rats (2.5 g·kg-1),and were analyzed by HPLC.Pharmacokinetic parameters were valuated by 3P97 software. Results Pharmacokinetic parameters of loureirin A were as follows:Ka (1.46±0.19) h-1,t1/2(Ka) (0.48±0?06) h,t1/2(K) (2.59±0.67) h,tmax (2.00±0.55) h,Cmax (1.13±0.24) μg·mL-1,AUC (2.84±0.68) μg·h·mL-1.Conclusion The results demonstrated that the pharmacokinetics of loureirin A was consistent with one-compartment model,which was absorbed and distributed rapidly in rats.

　　Key words: Dragon′s blood;loureirin A;HPLC;pharmacokinetics

　　血竭(Dragon′s blood) 又名麒麟竭，是傳統名貴中藥。國產血竭稱龍血竭，具有祛瘀定痛、止血生肌的功效[1]，被譽為“活血圣藥”，臨床應用廣泛。龍血竭的主要成分為黃酮類化合物,其在治療冠心病、腦梗死、心肌缺血、腦缺血損傷等方面有顯著療效[2-3]。龍血素A是龍血竭黃酮的主要成分之一，目前未見關于龍血素A體內藥動學的文獻報道。本文采用HPLC法[4]測定龍血素A在大鼠體內的血藥濃度，研究龍血素A在大鼠體內的藥動學，為臨床應用提供理論依據。

　　1儀器與材料

　　1.1動物

　　SD大鼠66只，體質量(250±20)g，雌雄兼備，由中山大學醫學院動物中心提供，合格證號：(粵)2006A064。

　　1.2儀器

　　Waters高效液相色譜儀：515 HPLC泵，2487雙波長吸收監測器，N-2000雙通道色譜工作站(浙江大學智能信息工程研究所);TDL80-2B臺式離心機(上海安亭科學儀器廠);SCQ5201超聲儀(上海超聲波儀器廠);ZH-2 BLENDER渦旋混合器(天津藥典標準儀器廠)。

　　1.3材料

　　廣西產龍血竭(廣西中醫學院制藥廠提供);龍血素A對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：200402);乙腈、甲醇(色譜純)，乙酸乙酯、無水乙醇、冰醋酸(分析純)。

　　2方法與結果

　　2.1色譜條件

　　色譜柱：Diamonsil C18(5 μm，250 mm×4.6 mm);保護柱：Easyguard C18 Replacement CartridgesCat#6101;流動相：乙腈-體積分數1%冰醋酸(體積比35∶65);檢測波長：280 nm;流速：1.2 mL·min-1，柱溫:25 ℃;進樣量:20 μL。

　　2.2血樣的采集和處理 

　　大鼠禁食(自由飲水)12 h后，按100 g大鼠給予龍血竭250 mg，灌胃給藥。分別在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于頸動脈取血,置于用肝素預處理過的離心管中。取全血1 mL置離心管中，加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL，渦旋混合均勻，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液，提取3次，合并上清液，50 ℃水浴揮干，于殘渣中加入100 μL甲醇，超聲處理使之溶解，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液作為樣品，注入高效液相色譜儀進行測定，記錄色譜圖與峰面積，采用外標法定量。

　　2.3方法學考察[3]

　　2.3.1龍血素A對照品貯備液的制備取龍血素A對照品，用甲醇配制成每1 mL約含100 μg的溶液，作為對照品貯備液。

　　2.3.2方法專屬性取大鼠2只，實驗前禁食12 h，自由飲水，1只做空白對照，1只按100 g給予龍血竭250 mg灌胃給藥，給藥2 h后取血樣，按“2.2”項下方法操作測定。由圖1可見，全血中的內源性物質不干擾龍血素A的測定，表明本方法有較好的專屬性。[PSD261;S*2〗A.空白血漿; B.空白血漿+對照品; C.樣品圖1 HPLC圖譜Figure 1HPLC chromatograms

　　2.3.3標準曲線與最低檢測限取空白全血適量，精密加入龍血素A對照品儲備液，配制質量濃度為0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列濃度標準溶液，按“2.2”項下的方法，自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起，依法操作，記錄峰面積。以質量濃度(ρ)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標進行回歸，結果表明龍血素A的質量濃度在0.076～4.836 μg·mL-1范圍內與峰面積線性關系良好，回歸方程為：A=49679ρ+2784.3，r=0.998 3(n=7)。取標準曲線用溶液，逐步稀釋至溶液中龍血素A的響應值約為基線噪音的3倍(S/N=3)，記錄色譜圖，得出最低檢測限(LOD)為0.025 μg·mL-1。

　　2.3.4相對回收率與精密度精密量取對照品儲備液，以空白全血分別配成高、中、低3種質量濃度(4.836、1.209、0.076 μg·mL-1)的樣品溶液，按 “2.2” 項下的方法，自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起，依法操作。記錄峰面積并代入標準曲線計算各樣品濃度，計算相對回收率。結果表明，高、中、低3個質量濃度的樣品的相對回收率均高于80%。見表1。

　　取以上高、中、低3個質量濃度的樣品溶液于同一天內連續測定3次，計算日內RSD;每天測定3種濃度樣品各1次，連續測定3 d，計算日間精密度RSD。結果日內和日間精密度RSD值均小于10%，表明該法精密度較好。見表1。

　　2.3.5樣品穩定性精密量取對照品儲備液，以空白全血配制質量濃度為0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的樣品，分別考察室溫25 ℃放置0、4、12、24 h，-20 ℃冰箱放置24 h，-20 ℃下反復凍融3次的穩定性。結果各樣品的RSD值均在2.76%～11.42%(n=6)之間，符合《中國藥典》相關規定，表明樣品穩定性較好。表1龍血素的回收率與精密度

　　2.4大鼠體內的藥動學

　　取SD大鼠66只，禁食不禁水12 h后，按時間點隨機分為11組，每個時間點6只，按100 g體質量給予龍血竭250 mg灌胃給藥，采集不同時間點的血樣，按“2.2”項下方法處理樣品并測定龍血素A的濃度。

　　2.4.1血藥濃度曲線按不同時間點求算平均血藥質量濃度，并繪制血藥質量濃度—時間曲線，見圖2。由圖可見，血藥質量濃度達峰時間為(2.0±0?55)h，峰質量濃度為(1.13±0.24)μg·mL-1。[PSD262;S*2〗圖2 大鼠口服龍血竭(2.5 g·kg-1)后龍血素A平均血藥質量濃度—時間曲線Figure 2Mean concentration-time curve of loureirin A in rats (n=6)

　　2.4.2藥動學參數用藥動學數據處理軟件3P97對所測得數據進行擬合，所得藥動學參數見表2。由表2可見，龍血素A在大鼠體內符合一室模型。

　　3討論

　　3.1本文選取龍血竭主要成分之一的龍血素A作為指標成分，對龍血素A在大鼠體內的藥動學情況進行了研究，為臨床用藥提供了依據。

　　3.2對SD大鼠一次性灌胃龍血竭(250 mg/100 g)后，取全血進行處理后測定血藥濃度，根據AIC(Akaike′s information criterion)值最小原則，確定其符合一室吸收動力學模型，吸收半衰期為0.48 h;消除半衰期為2.59 h。從本文得到的藥動學參數，并結合文獻[6]數據推斷，龍血竭口服后吸收較快，且迅速向體內各組織分布。表2大鼠口服龍血竭(2.5 g · kg-1)后藥動學參數

【參考文獻】

  　[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：96.

　　[2] 劉忠和.復方血竭膠囊對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的拮抗作用[J].武漢大學學報:醫學版,2005,26(6):174-177.

　　[3] 方偉蓉,李運曼,鄧嘉元.龍血竭總黃酮對動物心肌缺血的保護作用[J].中國臨床藥理學與治療學,2005,10(9):1020-1024.

　　[4] 周曄,金描真,易軍,等.含中藥龍血竭的血清處理方法研究[J].廣東藥學院學報,2007,23(2):151-153.

　　[5] 李好枝.體內藥物分析[M].北京：人民衛生出版社，2008.

　　[6] 孫曉博,金描真,李雪,等.龍血竭中龍血素A與龍血素B在大鼠體內的組織分布研究[J].廣東藥學院學報,2008,24(3)：214-216.
 

【龍血竭中龍血素A在大鼠體內的藥動學研究】相關文章：

基于J2EE的遠動系統Web實時曲線的研究05-11

口服避孕藥在痛經治療中的應用論文04-13

姜黃素對代謝綜合征大鼠ICAM08-24

公共藝術在城市中的交互研究論文05-23

工業設計中的價值潛力研究05-11

閱讀教學中的交互活動研究05-18

經濟學中的數學意義06-12

通信工程中傳輸技術研究05-14

醫院績效管理中的薄弱點與突破研究05-03

復雜適應系統中利益群體博弈的形成研究05-04