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食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用探討
引導(dǎo)語(yǔ)：以下是YJBYS的小編為大家找到的食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用的探討。希望能幫助大家!
摘要：相對(duì)于傳統(tǒng)檢測(cè)方法，食品微生物快速檢測(cè)方法的應(yīng)用，使食品微生物檢測(cè)和鑒定更快、更方便、更靈敏、更準(zhǔn)確。本文簡(jiǎn)要探討當(dāng)前發(fā)展較成熟的幾類食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)，從而給檢測(cè)工作者提供參考。
關(guān)鍵詞：食品、微生物檢測(cè)、快速檢測(cè)技術(shù)
食品病原微生物檢測(cè)是保障食品安全的重要組成部分，依靠采用培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)、分離、生化鑒定及革蘭染色鏡檢等傳統(tǒng)檢測(cè)方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的專業(yè)技術(shù)、操作技能以及工作經(jīng)驗(yàn)要求極高，操作步驟復(fù)雜繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，靈敏度低，準(zhǔn)確性差，容易出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。近年來(lái)，微生物快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展迅速，運(yùn)用分子生物學(xué)、電子技術(shù)、生物化學(xué)、免疫學(xué)等技術(shù)對(duì)微生物進(jìn)行分離、鑒定和計(jì)數(shù)，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，更快、更方便、更靈敏、更準(zhǔn)確。
一、主要食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)
1 分子生物學(xué)技術(shù)
(1)PCR技術(shù)
通過(guò)大量復(fù)制目的菌的高度保守的一段或幾段特異性DNA并確認(rèn)這些DNA的片段的大小來(lái)完成檢測(cè)，如果樣品中存在目的菌，就能復(fù)制出有關(guān)特異性DNA的片段，而復(fù)制特異性DNA的片段靠聚合酶鏈反應(yīng)―PCR技術(shù)。
該技術(shù)已大量運(yùn)用到食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域，并形成標(biāo)準(zhǔn)化，如SN/T 1632.2-2005《奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法 第3部分:熒光PCR方法》、DIN 10135:1999《沙門氏菌聚合酶連鎖反應(yīng)(PCR)檢驗(yàn)方法、ISO 20837:2006《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)―聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)食源病原體―定性檢測(cè)用樣品的制備》
目前利用PCR技術(shù)檢測(cè)病原菌的商品化儀器有被AOAC、USDA-FSIS、Health Canada、AFNOR等權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可的BAX@全自動(dòng)病原菌檢測(cè)系統(tǒng)，可檢測(cè)沙門氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特菌等致病菌，此外還有RiboPrinter@微生物鑒定系統(tǒng)，可鑒定沙門氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特菌和阪崎腸桿菌等致病菌在內(nèi)的1400多種細(xì)菌。
在1996年由美國(guó)AB公司推出的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，與常規(guī)PCR儀相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR產(chǎn)物污染、自動(dòng)化程度高，同時(shí)能對(duì)起始模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量等特點(diǎn)。
(2)核酸探針技術(shù)
核酸探針是指帶有標(biāo)記的特異DNA的片段。根據(jù)堿基互補(bǔ)原則，核酸探針能特異性地與目的DNA雜交，最后用特定的方法測(cè)定標(biāo)記物。探針標(biāo)記方式為放射性標(biāo)記、非放射性標(biāo)記，具有直觀、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，基于核酸探針雜交的基因芯片技術(shù)，雖然其靈敏度與PCR技術(shù)相當(dāng)，但其具有高通量、多參數(shù)、高精確度和快速分析等特征，所以備受青睞。我國(guó)已將此技術(shù)引入到行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中來(lái)，如SN/T 1543-2005《食源性致病菌基因芯片鑒定方法》。
2 免疫學(xué)技術(shù)
(1)熒光抗體法
用熒光物質(zhì)標(biāo)記抗血清的抗體，即抗抗體。使用熒光顯微鏡觀察樣品中的目的菌-熒光標(biāo)記抗體結(jié)合物或目的菌-抗體-熒光標(biāo)記抗抗體結(jié)合物來(lái)判斷結(jié)果。在食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域內(nèi)，國(guó)內(nèi)使用的較多是mini-VIDAS全自動(dòng)熒光酶標(biāo)免疫測(cè)試系統(tǒng)，該系統(tǒng)已被AOAC、AFNOR等權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可，可檢驗(yàn)沙門氏菌、單增李斯特氏菌、大腸桿菌O157、葡萄球菌腸毒素等。
(2)免疫酶技術(shù)
以酶標(biāo)記抗體或抗抗體，抗原與酶標(biāo)記抗體，或抗原-抗抗結(jié)合物與酶標(biāo)記抗抗體特異性結(jié)合。根據(jù)酶反應(yīng)有色反應(yīng)的有無(wú)及其濃度，即可間接推測(cè)被檢抗原或抗體是否存在及其數(shù)量。常用酶技術(shù)分為固相免疫酶測(cè)定技術(shù)、免疫酶定位技術(shù)和免疫酶沉淀技術(shù)。在食品微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域內(nèi)，國(guó)內(nèi)使用比較多的有Reveal@大腸桿菌O157：H7檢測(cè)系統(tǒng)、Reveal@沙門氏菌檢測(cè)系統(tǒng)及GeneQuence@李斯特氏菌檢測(cè)試劑盒、金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒等。
(3)免疫磁珠技術(shù)
用連接抗體的磁珠捕捉增菌液中的目的菌，然后將捕捉到的抗原即目的菌劃線于選擇性平板，觀察菌落。或用熒光或酶標(biāo)記的抗抗體進(jìn)行檢測(cè)。或用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。此技術(shù)在ISO 166654:2001《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)―大腸桿菌O157基準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》上得到了應(yīng)用。目前可利用該技術(shù)對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌0157、大腸桿菌0145、大腸桿菌O111等進(jìn)行測(cè)試。
(4)免疫層析技術(shù)
該技術(shù)是一種膜固相免疫測(cè)定技術(shù)。滴加在膜一端的樣品溶液受膜的毛細(xì)管作用向另一端移動(dòng)，猶如層析一般。移動(dòng)過(guò)程中被分析物與固定于膜上某一區(qū)域的抗原或抗體結(jié)合而被固相化，無(wú)關(guān)物質(zhì)則越過(guò)該區(qū)域而被分離，然后通過(guò)標(biāo)記物的顯色來(lái)判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以膠體金為標(biāo)記物的實(shí)驗(yàn)稱為膠體金免疫層析技術(shù)，該技術(shù)具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確和無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，可對(duì)食品中大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、布氏桿菌、霍亂弧菌等進(jìn)行檢測(cè)。
(5)其它免疫技術(shù)
細(xì)菌直接計(jì)數(shù)法主要包括流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)和固相細(xì)胞計(jì)數(shù)(solid phasecytometry，SPC)法。FCM通常以激光作為發(fā)光源，經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大小;熒光信號(hào)的強(qiáng)度則代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，由此可通過(guò)儀器檢測(cè)散射光信號(hào)和熒光信號(hào)來(lái)估計(jì)微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)具有高度的敏感性，可同時(shí)對(duì)目的菌進(jìn)行定性和定量鑒定。目前已經(jīng)建立了細(xì)菌總數(shù)、致病性沙門氏菌、大腸埃希氏菌等的FCM檢驗(yàn)方法。
3.其它技術(shù)
即用型紙片法
3M公司的perrifilmTMPlate@系列微生物測(cè)試片，可分別檢測(cè)菌落總數(shù)、大腸菌群計(jì)數(shù)、霉菌和酵母計(jì)數(shù)。由RCP Scientific Inc公司開發(fā)上市的Regdigel@系列，除上述項(xiàng)目外還有檢測(cè)乳桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌的產(chǎn)品。3M公司生產(chǎn)的PF(Petrifilm)試紙還加入了染色劑、顯色劑，增強(qiáng)了菌落的目視效果，而且避免了熱瓊脂法不適宜受損細(xì)菌恢復(fù)的缺陷。霉菌快速檢驗(yàn)紙片，應(yīng)用于食品檢驗(yàn)中的霉菌具有操作簡(jiǎn)便，僅需36℃培養(yǎng)，不需要低溫設(shè)備;快速，僅需2d就可觀察結(jié)果，比現(xiàn)在的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法縮短3～5d，大大提高了工作效率。紙片法與國(guó)標(biāo)法在霉菌檢出率上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且菌落典型，易判定。
二、食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)的局限性
快速檢測(cè)技術(shù)的評(píng)估結(jié)果表明，其對(duì)于某類食品的性能優(yōu)于其他食品，很大程度上是由于食品成分干擾所致，有些食品成分對(duì)于快速檢測(cè)方法中所應(yīng)用的技術(shù)是比較麻煩的。例如在采用PCR技術(shù)時(shí)，食物中的高蛋白、高脂肪對(duì)Taq酶具有抑制作用，可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假陰性。同時(shí)PCR操作過(guò)程要求嚴(yán)格，微量的外源性DNA進(jìn)入PCR后可以引起無(wú)限放大產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。
三、結(jié)束語(yǔ)
隨著某一快速檢測(cè)技術(shù)更加頻繁的使用，其好處與局限性同時(shí)變得更加明顯，使用者在選擇這些快速檢測(cè)技術(shù)時(shí)，應(yīng)考慮此技術(shù)的準(zhǔn)確性、特異性、實(shí)用性、穩(wěn)定性、靈敏度以及采用此技術(shù)的供應(yīng)價(jià)格、認(rèn)可程度和售后服務(wù)等因素，綜合判別后進(jìn)行選擇。
參考文獻(xiàn)：
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