食品微生物快速檢測技術應用探討
引導語：以下是YJBYS的小編為大家找到的食品微生物快速檢測技術應用的探討。希望能幫助大家!
摘要：相對于傳統檢測方法，食品微生物快速檢測方法的應用，使食品微生物檢測和鑒定更快、更方便、更靈敏、更準確。本文簡要探討當前發展較成熟的幾類食品微生物快速檢測技術，從而給檢測工作者提供參考。
關鍵詞：食品、微生物檢測、快速檢測技術
食品病原微生物檢測是保障食品安全的重要組成部分，依靠采用培養基增菌培養、分離、生化鑒定及革蘭染色鏡檢等傳統檢測方法，對實驗室技術人員的專業技術、操作技能以及工作經驗要求極高，操作步驟復雜繁瑣，檢測周期長，靈敏度低，準確性差，容易出現假陰性或假陽性結果。近年來，微生物快速檢測技術發展迅速，運用分子生物學、電子技術、生物化學、免疫學等技術對微生物進行分離、鑒定和計數，與傳統檢測方法相比，更快、更方便、更靈敏、更準確。
一、主要食品微生物快速檢測技術
1 分子生物學技術
(1)PCR技術
通過大量復制目的菌的高度保守的一段或幾段特異性DNA并確認這些DNA的片段的大小來完成檢測，如果樣品中存在目的菌，就能復制出有關特異性DNA的片段，而復制特異性DNA的片段靠聚合酶鏈反應―PCR技術。
該技術已大量運用到食品微生物檢測領域，并形成標準化，如SN/T 1632.2-2005《奶粉中阪崎腸桿菌檢驗方法 第3部分:熒光PCR方法》、DIN 10135:1999《沙門氏菌聚合酶連鎖反應(PCR)檢驗方法、ISO 20837:2006《食品和動物飼料微生物學―聚合酶鏈反應(PCR)檢測食源病原體―定性檢測用樣品的制備》
目前利用PCR技術檢測病原菌的商品化儀器有被AOAC、USDA-FSIS、Health Canada、AFNOR等權威機構認可的BAX@全自動病原菌檢測系統，可檢測沙門氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特菌等致病菌，此外還有RiboPrinter@微生物鑒定系統，可鑒定沙門氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特菌和阪崎腸桿菌等致病菌在內的1400多種細菌。
在1996年由美國AB公司推出的實時熒光定量PCR儀，與常規PCR儀相比，它具有特異性更強、有效解決PCR產物污染、自動化程度高，同時能對起始模板進行準確定量等特點。
(2)核酸探針技術
核酸探針是指帶有標記的特異DNA的片段。根據堿基互補原則，核酸探針能特異性地與目的DNA雜交，最后用特定的方法測定標記物。探針標記方式為放射性標記、非放射性標記，具有直觀、準確等特點，基于核酸探針雜交的基因芯片技術，雖然其靈敏度與PCR技術相當，但其具有高通量、多參數、高精確度和快速分析等特征，所以備受青睞。我國已將此技術引入到行業標準中來，如SN/T 1543-2005《食源性致病菌基因芯片鑒定方法》。
2 免疫學技術
(1)熒光抗體法
用熒光物質標記抗血清的抗體，即抗抗體。使用熒光顯微鏡觀察樣品中的目的菌-熒光標記抗體結合物或目的菌-抗體-熒光標記抗抗體結合物來判斷結果。在食品微生物檢測領域內，國內使用的較多是mini-VIDAS全自動熒光酶標免疫測試系統，該系統已被AOAC、AFNOR等權威機構認可，可檢驗沙門氏菌、單增李斯特氏菌、大腸桿菌O157、葡萄球菌腸毒素等。
(2)免疫酶技術
以酶標記抗體或抗抗體，抗原與酶標記抗體，或抗原-抗抗結合物與酶標記抗抗體特異性結合。根據酶反應有色反應的有無及其濃度，即可間接推測被檢抗原或抗體是否存在及其數量。常用酶技術分為固相免疫酶測定技術、免疫酶定位技術和免疫酶沉淀技術。在食品微生物檢驗領域內，國內使用比較多的有Reveal@大腸桿菌O157：H7檢測系統、Reveal@沙門氏菌檢測系統及GeneQuence@李斯特氏菌檢測試劑盒、金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒等。
(3)免疫磁珠技術
用連接抗體的磁珠捕捉增菌液中的目的菌，然后將捕捉到的抗原即目的菌劃線于選擇性平板，觀察菌落�；蛴脽晒饣蛎笜擞浀目箍贵w進行檢測�；蛴镁酆厦告準椒磻夹g進行進一步檢測。此技術在ISO 166654:2001《食品和動物飼料微生物學―大腸桿菌O157基準檢驗方法》上得到了應用。目前可利用該技術對沙門氏菌、大腸桿菌0157、大腸桿菌0145、大腸桿菌O111等進行測試。
(4)免疫層析技術
該技術是一種膜固相免疫測定技術。滴加在膜一端的樣品溶液受膜的毛細管作用向另一端移動，猶如層析一般。移動過程中被分析物與固定于膜上某一區域的抗原或抗體結合而被固相化，無關物質則越過該區域而被分離，然后通過標記物的顯色來判定實驗結果。以膠體金為標記物的實驗稱為膠體金免疫層析技術，該技術具有簡單、快速、準確和無污染等優點，可對食品中大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、布氏桿菌、霍亂弧菌等進行檢測。
(5)其它免疫技術
細菌直接計數法主要包括流式細胞儀(flow cytometry，FCM)和固相細胞計數(solid phasecytometry，SPC)法。FCM通常以激光作為發光源，經過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下產生散射光和激發熒光。光散射信號基本上反映了細胞體積的大小;熒光信號的強度則代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度，由此可通過儀器檢測散射光信號和熒光信號來估計微生物的大小、形狀和數量。流式細胞計數具有高度的敏感性，可同時對目的菌進行定性和定量鑒定。目前已經建立了細菌總數、致病性沙門氏菌、大腸埃希氏菌等的FCM檢驗方法。
3.其它技術
即用型紙片法
3M公司的perrifilmTMPlate@系列微生物測試片，可分別檢測菌落總數、大腸菌群計數、霉菌和酵母計數。由RCP Scientific Inc公司開發上市的Regdigel@系列，除上述項目外還有檢測乳桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌的產品。3M公司生產的PF(Petrifilm)試紙還加入了染色劑、顯色劑，增強了菌落的目視效果，而且避免了熱瓊脂法不適宜受損細菌恢復的缺陷。霉菌快速檢驗紙片，應用于食品檢驗中的霉菌具有操作簡便，僅需36℃培養，不需要低溫設備;快速，僅需2d就可觀察結果，比現在的國家標準檢驗方法縮短3～5d，大大提高了工作效率。紙片法與國標法在霉菌檢出率上差異無統計學意義，且菌落典型，易判定。
二、食品微生物快速檢測技術的局限性
快速檢測技術的評估結果表明，其對于某類食品的性能優于其他食品，很大程度上是由于食品成分干擾所致，有些食品成分對于快速檢測方法中所應用的技術是比較麻煩的。例如在采用PCR技術時，食物中的高蛋白、高脂肪對Taq酶具有抑制作用，可能導致檢測結果假陰性。同時PCR操作過程要求嚴格，微量的外源性DNA進入PCR后可以引起無限放大產生假陽性結果。
三、結束語
隨著某一快速檢測技術更加頻繁的使用，其好處與局限性同時變得更加明顯，使用者在選擇這些快速檢測技術時，應考慮此技術的準確性、特異性、實用性、穩定性、靈敏度以及采用此技術的供應價格、認可程度和售后服務等因素，綜合判別后進行選擇。
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