標(biāo)本溶血對檢測乙肝表面抗原的影響
在臨床檢測中，常常遇到溶血的標(biāo)本。溶血對ELISA檢測乙肝表面抗原(HBsAg)究竟是否有影響?下面是yjbys小編為大家?guī)淼臉?biāo)本溶血對檢測乙肝表面抗原的影響，歡迎閱讀。
一、標(biāo)本溶血的原因
溶血是臨床檢驗中最常見的一種干擾和影響因素。溶血可分為體內(nèi)溶血和體外溶血[1]。體內(nèi)溶血可由物理因素(如人工心臟瓣膜或大血管手術(shù)后)、化學(xué)因素(如惡性瘧)和藥物毒性反應(yīng)等因素引起。體外溶血可由物理因素(抽血時負(fù)壓過大、水浴溫度過高、冰凍、振蕩等機(jī)械性破壞)、化學(xué)因素(血樣接觸表面活性劑)和代謝因素(如遺傳病引起紅細(xì)胞脆性增加)引起。
在臨床上常見的引起標(biāo)本溶血的原因包括[2]:由于病人嚴(yán)重脫水、低血容量休克等原因?qū)е麓┐汤щy造成的溶血;由于抽血器具質(zhì)量不合格如真空管負(fù)壓不夠或塑料試管質(zhì)量較差導(dǎo)致的溶血;用干燥管采血為了盡快分離血清用竹簽攪拌不當(dāng)引起的溶血等。
二、標(biāo)本溶血對乙肝表面抗原檢測的影響
一些研究沒有發(fā)現(xiàn)標(biāo)本溶血對HBsAg檢測的影響。李穗芬[3]對20例HBsAg陰性和10例HBsAg陽性病人的`溶血和非溶血標(biāo)本包括10例OD值在臨界值附近的標(biāo)本進(jìn)行了對照，結(jié)果非溶血和溶血標(biāo)本的陰、陽性結(jié)果完全一致。20例HBsAg陰性和10例OD值在臨界值附近的樣本，溶血與對應(yīng)非溶血標(biāo)本OD值間差異沒有顯著性;10例HBsAg陽性樣品，溶血標(biāo)本OD值明顯大于對應(yīng)非溶血標(biāo)本OD值。因此得出結(jié)論，標(biāo)本溶血不影響HBsAg結(jié)果的判定，只是使HBsAg陽性標(biāo)本的OD值提高。
許斌等[4]對HBsAg強(qiáng)陽性樣品的非溶血與溶血(Hb濃度為241g/L)標(biāo)本的A值作了對照后未發(fā)現(xiàn)兩者有統(tǒng)計學(xué)差異，得出結(jié)論:溶血對HBsAg的檢測沒有影響(嚴(yán)格意義上應(yīng)表述為:溶血對HBsAg強(qiáng)陽性標(biāo)本的檢測沒有影響)。單桂秋等[5]的研究也顯示，HBsAg陽性樣品的非溶血與溶血標(biāo)本的A值間經(jīng)t檢驗差異無顯著性。
其他的一些研究則發(fā)現(xiàn)，溶血對HBsAg的檢測有影響。錢厚明等 [6]發(fā)現(xiàn)，在17例溶血標(biāo)本中，初檢的5例HBsAg陽性標(biāo)本，經(jīng)重新抽血復(fù)檢后有2例仍為陽性，另3例轉(zhuǎn)陰。認(rèn)為是溶血導(dǎo)致了假陽性的出現(xiàn)。劉玉振等[7]研究發(fā)現(xiàn)，溶血對HBsAg的檢測有影響，當(dāng)紅細(xì)胞濃度>25%造成的溶血可導(dǎo)致假陽性。龍憲和等[8]研究發(fā)現(xiàn)，無論在健康人還是乙肝病毒感染者中，溶血均導(dǎo)致了ELISA一步法檢測HBsAg假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，而采用二步法則可以保證結(jié)果判讀無誤。
三、標(biāo)本溶血對乙肝表面抗原檢測影響的可能機(jī)制
溶血是由于各種原因造成紅細(xì)胞破壞，胞內(nèi)血紅蛋白(Hb)等物質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液進(jìn)入血清。溶血對ELISA的影響主要是反應(yīng)孔對溶血血清中Hb的非特異性吸附和溶血時細(xì)胞內(nèi)液對血清的稀釋作用。單桂秋等[5]的實驗也證明了溶血對血清具有稀釋作用。
在ELISA試驗中，酶標(biāo)反應(yīng)板孔包被物的濃度是一個相對定值，抗原抗體反應(yīng)存在最適比例和后帶現(xiàn)象，因此，HBsAg濃度與A值只是在一定的范圍內(nèi)呈一定的線性關(guān)系;當(dāng)HBsAg達(dá)到一定濃度時A值的變化進(jìn)入平臺期;當(dāng)HBsAg濃度太高時，A值反而會降低。因此，溶血可以使HBsAg濃度很高的樣品的A值升高(在一定程度上解決了后帶現(xiàn)象);當(dāng)HBsAg濃度與A值呈線性關(guān)系時才會因溶血的稀釋作用使A值下降;當(dāng)HBsAg濃度近臨界值時，可能造成假陰性。
Hb具有類過氧化物酶活性，其作用與辣根過氧化物酶類似，如果反應(yīng)孔非特異吸附Hb而殘留，則可催化底物顯色，使本底A值升高甚至造成假陽性。如果洗滌質(zhì)量好，則可能大大減少或排除非特異性吸附的干擾。單桂秋等[5]的實驗未體現(xiàn)血中Hb非特異性吸附的影響。龍憲和等[8]采用二步法操作可以排除溶血釋出的Hb對HBsAg檢測的影響也說明洗板質(zhì)量在ELISA檢測中的重要性。
總之，溶血對ELISA檢測HBsAg有一定的影響，影響的性質(zhì)及其大小因所使用的試劑、測定方法、標(biāo)本HBsAg的有無及濃度高低、洗板的質(zhì)量好壞而異。
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