艾滋病的實驗室檢測流程

艾滋病的實驗室檢測流程

　　中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心繼發布《全國艾滋病檢測技術規范(2009 年版)》后，近日即將發布 2015 年版《全國艾滋病檢測技術規范》，此規范堪稱艾滋病檢測實驗室的「紅寶書」，適用于疾病控制中心艾滋病確認實驗室和醫療機構的艾滋病初篩實驗室的 HIV 檢測技術操作。下面是小編為大家帶來的艾滋病的實驗室檢測流程的知識，歡迎閱讀。

　　檢測項目的樣品種類

　　1 HIV 抗體檢測：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。

　　2 HIV 抗原檢測：全血、血清、血漿、病毒培養上清液。

　　3 T 淋巴細胞亞群測定：EDTA 或肝素抗凝全血。

　　4 HIV-1 病毒載量、基因型、耐藥檢測：血漿、濾紙干血斑(DBS)。

　　5 HIV 核酸定性與定量、基因型檢測和 HIV-1 分離培養：淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞(PBMC)及全血。

　　當然，實驗室最常用的仍然是血液標本，其他只作為補充樣本。

　　HIV 抗體檢測

　　HIV 抗體檢測是艾滋病實驗室檢測的優先選擇項目，在國內絕大多數初篩實驗室應用最廣泛。

　　1 初篩方法

　　(1)酶聯免疫吸附試驗(ELISA)

　　ELISA 法檢測 HIV 抗體是 HIV 初篩實驗室最常用最普遍的方法，目前檢測試劑已經發展到第四代，即同時檢測血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗體，秉承「寧可錯殺一千，不可漏網一個」的革命精神，其靈敏度遠高于特異性，直叫 HIV 抗體無處遁形。

　　(2)化學發光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)

　　這個試驗方法是近 10 年迅猛發展的一種新型檢測方法，其采用發光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯合檢測抗原抗體，用發光或熒光儀測定結果，其靈敏度較 ELISA 有了進一步的提高，同時帶來的是檢測成本的增加和假陽性率的增高。

　　(3)快速檢測(RT)方法

　　此類方法操作簡便快速，適用于應急檢測、門診急診檢測，但靈敏度和特異性遠不如 ELISA 和發光法，但是經濟實惠，也有一定的市場影響力。主要包括以下幾種方法：明膠顆粒凝集試驗(PA)、免疫滲濾試驗、免疫層析試驗。

　　2 確認實驗

　　(1)免疫印跡試驗(WB)

　　WB 采用間接法檢測樣品中的抗 HIV-1/HIV-2 特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分離開來，經過一系列處理后，硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結合的抗體條帶，從而確診抗體的存在。

　　(2)條帶/線性免疫試驗(RIBA/LIA)

　　實驗原理基本同 WB 法，不再贅述。

　　HIV-1 抗原檢測

　　1 篩查實驗

　　(1)酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法)：即第四代抗原抗體聯合檢測試劑盒�？贵w包被固相反應孔(管)的底部，待測樣本中 P24 抗原與包被抗體形成抗原抗體復合物，再加入酶(HRP)標記的 HIV-1 抗體與抗原結合，加底物顯色，在酶標儀上讀取結果。因同時檢測抗原抗體，靈敏度大大提高，有效縮短了 HIV 感染的檢測窗口期，但因試劑成本較高，在普通篩查實驗室推廣有一定難度。

　　(2)酶聯熒光分析法(ELFA)：待測樣品的 p24 抗原與包被在固相孔(管)內的 p24 抗體結合，并被生物素標記的 p24 抗體識別。臨床實驗室應用前景不明朗，需要熒光檢測設備，成本較高。

　　(3)電化學發光法(ECLIA)：待測樣品的 p24 抗原與包被抗體的磁性微粒和發光劑標記的抗體在反應管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發光劑標記抗體復合物。

　　(4)抗原抗體快速檢測法：同快速方法(RT)檢測抗體，不同之處是用 HIV 抗體包被載體，檢測靈敏度同樣較差。

　　2 中和試驗

　　中和試驗主要是 p24 抗原檢測的補充試驗，還可做 HIV-1RNA 的定性或定量檢測，以排除篩查試驗的假陽性。

　　(1)酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法)：待檢樣品先與中和劑(p24 抗原的抗體)共同孵育，如果樣品中存在 p24 抗原，中和抗體將與之結合形成復合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結合。

　　(2)酶聯熒光分析法(ELFA)：原理和檢測步驟同上述酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法)，中和率 ≥ 60 %，認為樣品中的 p24 抗原是真陽性。

　　(3)電化學發光法 (ECLIA)：原理和檢測步驟同上述酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法)，中和率大于 50%，認為樣品中的 p24 抗原是真陽性。

　　HIV 核酸檢測

　　目前國內 HIV 核酸檢測試劑主要為 Taqman 實時熒光 PCR 檢測試劑，可檢測血漿、血清、組織器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于檢測 RNA/DNA。全球目前正式用于臨床診斷 HIV-1 急性期感染的核酸檢測試劑比較少，主要是美國 FDA 批準的 Gen-Probe 公司生產的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性檢測試劑和歐盟批準的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性檢測試劑。

　　臨床診斷相關的檢測策略及結果報告

　　HIV 檢測陽性結果的檢測過程一般經歷兩個階段，初篩和復檢程序。以 HIV 抗體檢測為例，具體流程如下：

　　試劑 1 進行初篩，結果無反應，報告「HIV 抗體陰性」;結果有反應，不能出具陽性報告，必須進入復檢試驗。對初篩有反應的樣品，用原有試劑雙份或雙孔進行復檢試驗(或者兩種試劑復檢)，如均無反應，報告「HIV 抗體陰性」;如均有反應或一個有反應一個無反應，進行補充試驗(抗體確證試驗和 HIV-1 核酸試驗)，報告 HIV 感染待確定。

　　目前大部分臨床實驗室為艾滋病初篩實驗室，開展常規初篩實驗，發現陽性結果初步復檢后送省市 CDC 或當地其他確認實驗室做確認實驗。

　　目前國內實驗室多采用「初篩抗體+WB 法確認」等兩步法進行 HIV 檢測及確診，并嚴格進行人員、儀器、方法學質量控制，建立了遍布全國的臨床醫療機構的初篩實驗室及省市 CDC 的確認實驗室，基本滿足了日益增長的艾滋病病人的檢測及病情的變化的監測。

　　艾滋病基本常識

　　1、艾滋病的由來

　　艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合癥(AcquiredImmunodeficiencySyndrome AIDS)是人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirusHIV)破壞感染者免疫系統,逐漸導致免疫功能衰竭,最終感染者會死于任何一種(即使對正常人來說是微不足道的)感染、惡性腫瘤、神經系統病變;所以,預防、治療、控制感染是每一個艾滋病感染者都在關心的問題。

　　2、艾滋病的癥狀

　　HIV相關癥狀:主要表現為持續一個月以上的發熱、盜汗、腹瀉;體重減輕10%以上。部分病人表現為神經精神癥狀,如記憶力減退、精神淡漠、性格改變、頭痛、癲癇及癡呆等。另外還可出現持續性全身性淋巴結腫大,其特點為除腹股溝以外有兩個或兩個以上部位的淋巴結腫大;淋巴結直徑≥1cm,無壓痛,無粘連;持續時間3個月以上。

　　3、艾滋病的相關機會性感染癥狀

　　HIV相關機會性感染及腫瘤的常見癥狀:發熱、盜汗、淋巴結腫大、咳嗽咳痰咯血、呼吸困難、頭痛、嘔吐、腹痛腹瀉、消化道出血、吞咽困難、食欲下降、口腔白斑及潰瘍、各種皮疹、視力下降、失明、癡呆、癲癇、肢體癱瘓、消瘦、貧血、二便失禁、尿儲留、腸梗阻等。

　　如何進行自我檢測艾滋病

　　首先要看自己是否有如下高危行為：性生活比較復雜、男同性戀者、吸毒或是與他人混用注射器、曾被感染有艾滋病毒的針頭或是血制品感染史、母親為艾滋病患者等。

　　如有高危行為者，若是出現以下兩種或兩種以上情況，要引起高度警覺：近期體重驟降10%以上、慢性腹瀉或咳嗽長達一個月以上、持續或間歇發熱達一個月以上、全身可觸及有淋巴結腫大、反復出現帶狀皰疹或是慢性播散性單純皰疹感染、口咽部有念珠菌感染。

　　抽血進行常規檢查，有不同程度的貧血，同時白細胞計數減少提示有病毒感染。尿常規可見尿蛋白。

　　去醫院進行HIV—1抗體的檢測，ELISA測定法結果連續兩次為陽性者，再行WB法進行確診。

　　從血液、單個核細胞及腦脊液中如果能夠分離出人免疫缺陷病毒者，可以作為判定感染艾滋病。

　　得了艾滋病怎么辦

　　如果有不潔的性行為或者有過吸毒行為，那么過了三個月的窗口期，就應該去醫院進行艾滋病篩查。如果醫院的篩查結果是HIV抗體陽性，那么還需要去疾控中心做最后確診，如果疾控中心報告結果仍然是陽性，那么就確診了，您確實感染了HIV病毒。

　　經過篩查確診HIV病毒感染者后，最忌諱的就是恐慌和自暴自棄，應該第一時間調整心態，放棄悲觀的灰色的心情和想法，積極的接受疾控中心的治療。當然，目前世界針對艾滋病的治療除了控制病毒的復制，一般還沒有有效殺滅病毒的方法。抗逆轉錄是對抗艾滋病較為有效的方法。而且，疾控中心是免費發放抗病毒藥物的，關鍵是在發現早起就開始吃藥。

　　科學的用藥的同時還要調整心態，如果抑郁，悲觀，那么打敗你的不是病毒，而是你自己。是你自己低頭放棄了希望。調整好心態，平和的面對現實，才能讓我們的身體迸發活力，更加積極的對抗病毒的侵蝕。所以一個健康的心態是對抗艾滋病最有效的手段和途徑。

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