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高效液相色譜法測定咽寶合劑中連翹苷的含量
【摘要】 目的 制備咽寶合劑并對其進行質量控制。方法 運用薄層色譜法鑒別連翹；采用高效液相色譜法進行連翹苷的含量控制，色譜柱為Eclipse XDB-C18柱（250mmX4.6mm，5μm ）,流動相：氯仿—甲醇（6：1），檢測波長：277nm。 結果 在0.1～0.5g/L濃度范圍內連翹苷呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為99.01%，RSD=0.86%(n=5)。結論 本制備工藝簡便可行，含量測定快速準確，可用于本制劑的質量控制。?
【關鍵詞】 咽寶合劑 薄層色譜法 連翹苷 高效液相色譜法?
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咽寶合劑為臨床協(xié)定處方，具有清熱解毒、生津利咽之功效，主要用于急性咽炎、急性扁桃體炎及上呼吸道感染等。為更好地控制該品種的質量，筆者制定了制備工藝，并對其質量控制方法進行了研究，現(xiàn)報道如下：?
1 儀器與試藥?
LC—2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；LC solution色譜工作站。連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所）；咽寶合劑（規(guī)格100ml）；試劑均為分析純。?
2 處方與制備?
2.1 處方?
魚腥草6200g，石膏（打碎先煎）6 200g，連翹1 800g，蒲公英6 200g，紫蘇葉1 800g，蘆根1 800g，桑葉3 100g，黃芩1 800g，甘草920g，防腐劑適量，共制成10 000ml。?
2.2 制備 ?
取含有揮發(fā)性成分的飲片，用水適量浸泡，充分濕潤后，加水過藥面，煮沸后保持微沸約15min，濾過，濾液另器保存，取其它飲片，加水浸泡，充分濕潤后，與上述藥渣合并，加水過藥面2～4cm，煎煮2次，第1次保持微沸1～2h，第2次0.5～1h，時加攪拌，以煮透為度。
用100目篩濾過，合并兩次濾液，放置沉淀12h以上，取上清液濃縮至適量，加入上述另煎保存的濾液，趁熱加入防腐劑，攪勻，使成全量，分裝，即得。?
3 質量控制?
3.1 性狀?
本品為棕褐色液體，味苦而甜。?
3.2 鑒別?
取本品1ml，加甲醇5ml，振搖使溶解，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取連翹對照藥材0.5g，加甲醇10ml，置水浴上加熱回流20min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法??［１］?試驗，吸取上述兩種溶液各5μm，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄板上，以氯仿—甲醇（5：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
3.3 檢查?
應符合合劑項下有關的各項規(guī)定??［２］?。
3.4 含量測定?
本合劑的連翹中所含的有效成分連翹苷，在高效液相色譜柱分離中很容易和連翹中乃至樣品中所含其它成分分開，其化學性性質穩(wěn)定，在277nm紫外區(qū)有最大吸收??［３］?，重現(xiàn)性較好。因此，我們選擇了連翹苷作為指標成分，應用高效液相色譜法進行含量測定，從而有效控制咽寶合劑的內在質量。?
3.4.1 色譜條件：色譜柱：Eclipse XDB-C??18?柱（250mmX4.6mm，5μm ）；流動相：氯仿—甲醇（6：1）；檢測波長：277nm；流速：1ml/min，柱溫：30℃；進樣量10μl。?
3.4.2 標準曲線的繪制：精密吸取連翹苷對照品10mg置于10ml容瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度制成1g/L的連翹苷對照品溶液。精密吸取1g / L的連翹苷對照品分別稀釋配成0.1,0.2,0.3,0.4,0.5（lg / L）的連翹苷對照品溶液，分別進樣10μl，每個濃度重復6次，測定每個濃度的平均色譜峰面積積分值（A）與連翹苷濃度（C）之間的回歸方程為C=7.16X10-8+6.02X10-3，r=0.999。線性回歸曲線說明在0.1～0.5g/L濃度范圍內連翹苷濃度與色譜峰面積積分值呈良好的線性關系。?
3.4.3 對照品溶液的配制：精密稱取連翹苷對照品加甲醇溶液制成每1ml含0.82mg的溶液。?
3.4.4 供試品溶液的制備：精密量取咽寶合劑20ml，離心過濾，置于50ml圓底燒瓶中，加入氯仿分3次水浴回流萃取，每次萃取20min左右。合并3次氯仿液，水浴蒸干，用甲醇轉移至帶塞刻度試管中，蒸干甲醇，精密取1ml甲醇溶解殘渣，即得供試品溶液。?
3.4.5 陰性對照溶液的制備：照處方比例自行制備不含連翹苷的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制備。以上三種溶液按上述色譜條件進樣，測定結果表明：陰性對照在連翹苷峰相應的保留時間處無干擾。?
3.4.6 精密度試驗：精密吸取供試品溶液，按上述色譜條件，測定其中連翹苷的含量，連續(xù)進樣5次，每次10μl，測定峰面積，結果RSD=1.07%。?
3.4.7 回收率實驗：精密吸取已知含量的供試品樣品2ml，分別精密加入0.1g/L的lml標準品溶液1ml，搖勻后按含量測定方法測定其中連翹苷的含量，結果平均回收率為99.01%，RSD=0.86%（n=5）。?
3.4.8 樣品測定結果：按上述方法，測定3批樣品連翹苷的含量分別為6.2 103、6.1 376、6.2 201lg/L。?
4 討論?
采用本法測定咽寶合劑中連翹苷的含量，方法穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好，可作為控制本制劑質量的有效方法。?
參考文獻?
［１］國家藥典委員會編 . 中華人民共和國藥典（一部）［S］.2005年版 . 北京：化學工業(yè)出版社，2005：附錄48.?
［2］國家藥典委員會編 . 中華人民共和國藥典（一部）［S］.2005年版 . 北京：化學工業(yè)出版社，2005：附錄54.?
［3］張國剛，徐綏緒 . 高效液相色譜法測定抗病毒口服液中連翹苷的含量［Ｊ］.中草藥，1998，29（3）：162.
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