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      2. 脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)探討

        時(shí)間:2024-07-18 03:52:44 生命畢業(yè)論文 我要投稿
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        脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)探討

          干細(xì)胞是具有自我增殖及更新能力的細(xì)胞,依據(jù)不同分化階段可分為成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞兩類,以下是小編搜集整理的一篇探究脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)的論文范文,歡迎閱讀查看。

          【摘要】目的探討脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)。方法健康志愿者6例,志愿者均與抽脂要求相符,作為研究組;將同期另選6例健康志愿者作為對照組。分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25g,給予培養(yǎng),并觀察目標(biāo)細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),同時(shí)對異體脂肪干細(xì)胞及淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的增殖情況進(jìn)行觀察。結(jié)果脂肪干細(xì)胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題,且對照組與研究組每毫升細(xì)胞液細(xì)胞數(shù)(CPM)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論脂肪干細(xì)胞有較小排斥反應(yīng),臨床應(yīng)引起重視,加強(qiáng)培養(yǎng)及分離技術(shù)研究。

          【關(guān)鍵詞】脂肪干細(xì)胞;免疫學(xué)性質(zhì)

          干細(xì)胞是具有自我增殖及更新能力的細(xì)胞,依據(jù)不同分化階段可分為成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞兩類。與間質(zhì)干細(xì)胞相對比,脂肪干細(xì)胞(ADSCs)在體外更易擴(kuò)增,獲得容易,且免疫原性低,是臨床醫(yī)學(xué)及組織工程發(fā)展的重要突破。本探究分析脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì),現(xiàn)報(bào)告如下。

          1資料與方法

          1.1一般資料

          搜集本院2014年3月~2015年3月健康志愿者6例,志愿者均與抽脂要求相符,作為研究組;另選同期6例健康志愿者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn):均對本研究知情;均身體健康。研究組女3例,年齡21~37歲,平均年齡(28.46±3.36)歲;男3例,年齡20~38歲,平均年齡(29.65±3.34)歲。對照組女3例,年齡22~38歲,平均年齡(28.51±3.29)歲;男3例,年齡21~38歲,平均年齡(29.70±3.42)歲。兩組健康志愿者性別、年齡一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

          1.2方法

          分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25g,將其放在離心管中,后轉(zhuǎn)為培養(yǎng)皿中,準(zhǔn)備處理,離心管與培養(yǎng)皿均為無菌;剔除組織中筋膜及血管,使用無菌溶液反復(fù)進(jìn)行沖洗;處理后,用眼科剪對其進(jìn)行分割,大小約為1.5mm3,直至分割成糊狀,在37℃環(huán)境下,選擇Ⅰ型膠原酶(0.1%)予以震蕩進(jìn)行消化處理,速度為120r/min;采用LG-DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清(10%)終止消化,并離心10min,后獲得高濃度的間質(zhì)組織細(xì)胞團(tuán),對其進(jìn)行處理,選擇紅細(xì)胞裂解液,并去除紅細(xì)胞,采用篩網(wǎng)(100μm)進(jìn)行過濾;將過濾液取出,使用鏈霉素100g/L、青霉素100U/ml、LG-DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清進(jìn)行重懸處理;處理后,將其置于培養(yǎng)皿中,直徑為100mm,接種,設(shè)定濃度4×104/cm2;接種后,在體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),溫度設(shè)定為37℃,且每隔2d更換一次培養(yǎng)液;待細(xì)胞生長檢測80%~90%時(shí),按照比例1∶2進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

          觀察目標(biāo)細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),方法選擇流式細(xì)胞術(shù)。首先使用BSA-PBS溶液(0.5%)對脂肪干細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行洗滌,離心10min,1000r/min,獲取單細(xì)胞懸液,轉(zhuǎn)變細(xì)胞濃度1×109/L;其次對組織相容性抗原Ⅰ(MHCⅠ)、MHCⅡ、CD44、CD29、CD90、CD31、CD45、CD34進(jìn)行熒光標(biāo)記,將標(biāo)記后物質(zhì)加入懸液,將其和熒光標(biāo)記的非特異性IgG同型進(jìn)行對比分析,在37℃環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng),30min后,反復(fù)使用PBS進(jìn)行處理,使用多聚甲醛予以固定,用量30g/L,最后實(shí)施檢測,儀器選擇流式細(xì)胞儀。

          1.3觀察指標(biāo)

          觀察細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),同時(shí)對異體脂肪干細(xì)胞及淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的增殖情況進(jìn)行觀察。

          1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

          采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

          2結(jié)果

          2.1脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn)

          采用流式細(xì)胞術(shù)檢測脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),陰性表達(dá)抗原:CD31(2.81±1.04)%,CD34(17.12±0.54)%,CD45(1.39±0.27)%。陽性表達(dá)抗原:CD29(91.22±1.03)%,CD44(90.83±2.37)%,CD90(94.02±0.69)%。由此得知,脂肪干細(xì)胞無造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題。

          2.2淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)情況

          對照組與研究組CPM比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表示脂肪干細(xì)胞對異體移植的排斥作用較小。見表2。

          3討論

          脂肪的組織基質(zhì)內(nèi)存在大量ADSCs,作為成體干細(xì)胞,具有多向分化潛質(zhì),在誘導(dǎo)條件適宜的情況下可分化成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等,且增殖能力較強(qiáng)。研究顯示,ADSCs不僅具有細(xì)胞多分化功能,如軟骨、肌肉、成骨、神經(jīng)、脂肪等,而且其表面標(biāo)志表達(dá)同BMSs(骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)一致,包括CD166、CD106、CD105、CD29等[1]。B7-1、HLA類抗原、B7-2、CD40L和CD40在BMSc不表達(dá),體外BMSc能對淋巴細(xì)胞的反應(yīng)進(jìn)行抑制,而體內(nèi)應(yīng)用BMSc可使異體移植皮片成活時(shí)間延長,故同種異體BMSc是目前組織工程主要細(xì)胞來源[2]。

          體外培養(yǎng)時(shí)ADSCs對淋巴細(xì)胞增殖的抑制及刺激能力為ADSCs體外的免疫學(xué)性質(zhì),試驗(yàn)包括單向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、雙向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),前者主要用以檢測刺激細(xì)胞ADSCs所致淋巴細(xì)胞的增殖程度,數(shù)值用增殖后的數(shù)量表達(dá),且數(shù)值和ADSCs免疫原性之間呈正相關(guān);后者主要用來檢測雙方抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用,不對兩種細(xì)胞進(jìn)行滅活,互相作為反應(yīng)細(xì)胞及刺激細(xì)胞,數(shù)值用增殖后兩種細(xì)胞的總數(shù)量表達(dá)。ADSCs體外試驗(yàn)與多種可控因素相關(guān),在體內(nèi)試驗(yàn)中,ADSCs免疫學(xué)性質(zhì)為復(fù)雜性免疫反應(yīng)綜合作用的結(jié)果,異基因抗原免疫反應(yīng)與細(xì)胞因子、補(bǔ)體系統(tǒng)等密切相關(guān)。脂肪干細(xì)胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題,對異體移植的排斥作用較小,臨床應(yīng)加強(qiáng)對細(xì)胞分離及培養(yǎng)的深入研究。

          參考文獻(xiàn)

          [1]韓長杰,楊向群,張傳森.脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì).中國組織工程研究與臨床康復(fù),2010,14(27):5095-5098.

          [2]孔志華,袁玉林,熊志,等.脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)分析.現(xiàn)代診斷與治療,2014,25(22):5080-5082.

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