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檢驗技師考點：雜交瘤技術
雜交瘤技術是指兩個或兩個以上細胞合并形成一個細胞的現(xiàn)象。他可使兩個不同來源的細胞核在同一細胞中表達功能。下面是小編為大家收集的檢驗技師考點：雜交瘤技術，僅供參考，大家一起來看看吧。
檢驗技師考點：雜交瘤技術
雜交瘤技術的基本原理是用分泌抗體但不能長期培養(yǎng)的B細胞與能在體外長期培養(yǎng)并可低溫保存的腫瘤細胞進行雜交。篩選得到的雜交瘤細胞應該是既能分泌抗體又有瘤細胞的特性，可長期傳代培養(yǎng)，又可在液氮中保存的細胞。把這些細胞單克隆化，用單克隆化的雜交瘤細胞進行單克隆抗體的生產(chǎn)。
原理：最常用的單克隆抗體是小鼠的單抗，此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c小鼠的B細胞和它的骨髓瘤細胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細胞。B細胞是從免疫動物的脾臟中分離出來的。動物免疫方法與抗血清制備相同，只是在制備脾臟前3d必須進行一次靜脈加強注射以保證得到的B細胞有旺盛的分泌抗體的活性。骨髓瘤細胞有許多細胞株是經(jīng)過誘變和篩選得到的缺陷型。篩選的標準是
�、倭黾毎旧聿划a(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈，但不能分泌；
�、谑谴吸S嘌呤鳥嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷型。因為這種缺陷型的瘤細胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟(aminopterin)阻斷后，由于缺失這些酶，即使補充它的底物次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)，核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，結(jié)果導致瘤細胞死亡(圖7—2)。而雜交瘤細胞因帶有B細胞的全套基因，在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過替代的核酸合成途徑能正常合成DNA和RNA.所以雜交瘤能正常地生長繁殖而被選擇出來。未被融合的游離的B細胞只能存活3d而后自行死亡。這就是用HAT培養(yǎng)基進行選擇的原理。
產(chǎn)生背景
科勒和米爾斯廷于1975年發(fā)明了淋巴細胞雜交瘤技術，終于使制備純一抗體的難題獲得了解決。雜交瘤技術是由細胞融合技術發(fā)展而來�？贵w是由免疫的B淋巴細胞分泌的球蛋白，各個淋巴細胞分泌的抗體各不相同。因而，要獲得一種純一的抗體只有從一個B淋巴細胞產(chǎn)生的細胞群制取。然而，B淋巴細胞在體外不能長期存活，分裂2、3次即要死亡，因而無法得到由一個淋巴細胞的后代細胞群(克隆)分泌的大量抗體。骨髓瘤細胞在體外培養(yǎng)條件下具有無限繁衍的特性。免疫B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞。這種雜交細胞具有雙親細胞的遺傳特性，既能象B淋巴細胞一樣分泌抗體，又能象骨髓瘤細胞一樣無限增殖，從而成了分泌抗體的“永生細胞”�？评蘸兔谞査雇⒒谶@一原理，成功地發(fā)明了雜交瘤技術。
應用
單克隆抗體不僅在生物學和免疫學基礎研究中具有重要的價值，而且在實踐中的應用范圍亦極為廣泛。在醫(yī)學中，單克隆抗體已用于疾病的診斷，其優(yōu)點是診斷準確，無交叉反應。例如，單克隆抗體診斷乙型肝炎及潛伏的乙型肝炎病毒，則很少發(fā)生假陰性的漏診。單克隆抗體還可作為治療疾病的藥物載體。單克隆抗體對靶組織有專一親和性，故在體內(nèi)有特異定位分布的特點。把抗腫瘤藥物和抗某種腫瘤的單克隆抗體結(jié)合，則可使藥物在體內(nèi)有選擇地集中向該腫瘤細胞攻擊，只殺滅靶細胞，而不損傷正常組織，大大減輕了抗癌藥物的副作用。因此，載藥單克隆抗體有“生物導彈”之稱。制做的單克隆抗體多為鼠——鼠型，對人來說屬異種蛋白質(zhì)，因此難于用于治療。為了解決人體對異種單克隆抗體蛋白的排異作用，學者們正努力研制人——人型單克隆抗體，以利于大量應用于治療疾病。
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