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銅綠假單胞菌107株耐藥性分析
【摘要】 目的 分析2001年1月～2003年12月本院分離的銅綠假單胞菌耐性與耐藥趨勢。 方法 采用MicroScan WalkAway-40型全自動微生物鑒定/藥敏分析系統(tǒng)進(jìn)行菌株鑒定及藥物敏感性測試，耐藥性數(shù)據(jù)分析采用WHONET5軟件。結(jié)果 3年間分離出107株銅綠假單胞菌，其對12種抗菌藥物活性較好的是亞胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦，耐藥率為0.9％、5.6％、6.5％；耐藥率較高的是頭孢曲松鈉63.6％、頭孢噻肟鈉38.3％，氨曲南25.2％。其對頭孢噻肟鈉的耐藥率從2001年33.3％升至2003年的44.4％，同期對頭孢曲松鈉的耐藥率從48.1％升至68.9％，升幅達(dá)11.1％，20.8％。β－內(nèi)酰胺類抗生素哌拉西林耐藥率有下降趨勢，從22.2％降至15.6％。結(jié)論 本院監(jiān)測結(jié)果顯示銅綠假單胞菌對碳青霉烯類、氨基糖苷類、β－內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合藥物保持較好的敏感性，但三代頭孢菌素的耐藥率高于國家細(xì)菌耐藥監(jiān)測研究組（BRSSG）2001年、2002年的結(jié)果，還需加強(qiáng)對銅綠假單胞菌耐藥率有計(jì)劃地連續(xù)監(jiān)測。【關(guān)鍵詞】 銅綠假單胞菌；藥物敏感性測定；微生物；耐藥
【Abstract】 Objective To investigate the dynamics of resistance to antibiotics of the P.aeruginosa separated from patients in our hospital from Jan 2001 to Dec，2003. Methods The characteriztion and sensitivity to antibiotics of P.aeruginosa were analysed using MicroScan WalkAway-40 system.Results 107 strains of P.aeruginosa were separated and characterized during the three years. The rates of resistance to antibiotics were Imipenem 0.9%，Amikacin 5.6%， Piperacillin/Tazobactan 6.5%， Ceftriaxone 63.6%， Cefotaxime 38.3%，Aztreonam 25.2%.From 2001 to 2003，the resistance rate to Cefotaxime rose from 33.3% to 44.4%， Ceftriaxone from 48.1% to 68.9%.The resistance rate to β-lactam antibiotics，decreased from 22.2% to 15.6%，showed dropping tendency.Conclusion P.aeruginosa showed good sensitivity to Carbapenems，Aminoglycosides，β-lactam antibiotics，but resistance rates to third-generation Cephalosporins were higher in our hospital than whole nation in 2001 and 2002. The results suggested that the resistance of P.aeruginosa to antibiotics should be continuously monitored.
【Key words】 P.aeruginosa； sensitivity；resistance to drugs；determination of drug sensitivity；microorganism
銅綠假單胞菌是醫(yī)院內(nèi)感染的主要致病菌，可引起人體各部位的感染。該菌對多種抗生素天然耐藥，所有的抗菌藥物在延長治療的過程中又均可產(chǎn)生耐藥。因此，加強(qiáng)對銅綠假單胞菌的耐藥性監(jiān)測，及時(shí)了解其耐藥趨勢，對臨床合理應(yīng)用抗生素，減少耐藥菌的產(chǎn)生有著重要意義。本文分析了我院2001年1月～2003年12月從臨床標(biāo)本中分離的107株銅綠假單胞菌對12種抗生素的耐藥性，現(xiàn)報(bào)告如下。
1 資料與方法
1.1 標(biāo)本來源 2001年1月～2003年12月從臨床各科標(biāo)本中分離的銅綠假單胞菌107株。
1.2 儀器及試劑 MicroScan WalkAway-40型全自動微生物鑒定/藥敏測試儀及儀器配套使用的NC21鑒定/藥敏復(fù)合測試板為美國DADE公司出品；傳統(tǒng)生化微量管為杭州微生物試劑廠生產(chǎn)。
1.3 質(zhì)量控制 標(biāo)準(zhǔn)菌株為銅綠假單胞菌ATCC2783、大腸埃希菌ATCC25922，由江西省臨床中心提供。
1.4 方法
1.4.1 分離菌株 嚴(yán)格按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》對送檢標(biāo)本進(jìn)行分離培養(yǎng)，選取在哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基上生長良好的革蘭陰性桿菌，測氧化酶試驗(yàn)陽性者，做菌種鑒定。
1.4.2 菌種鑒定/藥敏測試 按MicroScan Walkway-40操作手冊對選取的菌落上機(jī)進(jìn)行菌種鑒定和藥物敏感性測定，對鑒定值偏低的菌株補(bǔ)充傳統(tǒng)生化試驗(yàn)，以確認(rèn)銅綠假單胞菌，并再次上機(jī)做藥敏測試。藥物敏感性由機(jī)內(nèi)自動分析系統(tǒng)根據(jù)美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）制定的MIC折點(diǎn)確定耐藥與否。
1.4.3 分析方法 107株銅綠假單胞菌耐藥性分析采用世界衛(wèi)生組織細(xì)菌耐藥性監(jiān)測中心推薦的WHONET5軟件進(jìn)行分析。
2 結(jié)果
2.1 107株銅綠假單胞菌在各種臨床標(biāo)本中的分布率 從2001～2003年從各種臨床送檢標(biāo)本中分離銅綠假單胞菌107株，其中痰液77株（71.2％）、咽拭子14株（13.1％）、分泌物9株（8.3％）。107株銅綠假單胞菌在各種臨床標(biāo)本中的分布，見表1。
表1 107株銅綠假單胞菌在各種臨床標(biāo)本中的分布率 株（％）
2.2 107株銅綠假單胞菌對12種抗菌藥物體外敏感試驗(yàn)結(jié)果 顯示12種抗菌藥物活性較好的是亞胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦，耐藥率為0.9％、5.6％、6.5％；耐藥率較高的是頭孢曲松鈉63.6％、頭孢噻肟鈉38.3％，氨曲南25.2％。見表2。
表2 107株銅綠假單胞菌對12種抗菌藥物體外敏感試驗(yàn)結(jié)果 株(%)
2.3 2001～2003年銅綠假單胞菌對12種抗生素的耐藥率比較 顯示三代頭孢菌素中頭孢他啶、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、氨曲南明顯呈逐年增高，由2001年的14.8%，33.3%，48.1%，22.2％到2003年增至24.4％，44.4％，68.9％，28.9％；β－內(nèi)酰胺類藥物哌拉西林耐藥率有下降趨勢，由22.2％降至15.6％。見表3。
3 討論
銅綠假單胞菌是臨床最常見的病原菌之一。近幾年來國內(nèi)外報(bào)道呼吸道感染的病原菌主要是革蘭陰性桿菌，其中又以銅綠假單胞菌最為多見，耐藥的銅綠假單胞菌感染常導(dǎo)致嚴(yán)重后果，是臨床治療中的一個(gè)難點(diǎn)。我院2001年1月～2003年12月分離的107例銅綠假單胞菌在各種臨床送檢標(biāo)本中以呼吸道標(biāo)本占首位（痰液71.2％，咽拭子13.9％），提示本院銅綠假單胞菌主要是以呼吸道感染為主，與國內(nèi)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致［1，2］。
表3 3年間銅綠假單胞菌對12種抗生素的耐藥率比較 耐藥株數(shù)(%)
銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制較復(fù)雜，有β-內(nèi)酰胺酶、青霉素結(jié)合蛋白酶（PBPS）的結(jié)構(gòu)和功能改變，細(xì)胞外膜主動外排系統(tǒng)的表達(dá)、外膜蛋白改變致通透性降低等，帶有耐藥質(zhì)粒的銅綠假單胞菌的大量存在是造成銅綠假單胞耐藥菌株逐年增高的重要原因。表2顯示107株銅綠假單胞菌對抗菌藥物活性最好的依次是碳青霉烯類-亞胺培南、氨基糖苷類-阿米卡星、β－內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合藥物-哌拉西林/他唑巴坦。亞胺培南是一種非典型的β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物，其對銅綠假單胞菌的活性，主要是通過特殊的孔蛋白通道OprD的擴(kuò)散而實(shí)現(xiàn)的，這就意味著一旦孔蛋白通道消失，則銅綠假單胞菌對亞胺培南就會產(chǎn)生耐藥性。事實(shí)上，國家細(xì)菌耐藥監(jiān)測研究組（BRSSG）2001年、2002年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明國內(nèi)多家醫(yī)院臨床分離的銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥率已分別達(dá)13.1％～19.1％［3，4］；MYSTIC細(xì)菌耐藥監(jiān)測組在2002年第42屆ICAAC會上報(bào)告美國對銅綠假單胞菌（1999～2002）監(jiān)測結(jié)果時(shí)，列出銅綠假單胞菌對亞胺培南，頭孢吡肟的敏感率均為86.9％，頭孢他啶敏感率為83.2％［5］，我院分離的銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥率僅為0.9％，明顯低于上述報(bào)告，可能與臨床較嚴(yán)格的控制使用該藥有關(guān)。阿米卡星、妥布霉素的耐藥率為5.6％，10.3％，是因?yàn)榘被擒疹愃幬镫m然有抗銅綠假單胞菌的活性，但其腎毒性較大，主要用在聯(lián)合治療時(shí)使用，臨床較少單獨(dú)使用。三代頭孢菌素-頭孢吡肟，氟喹諾酮類-環(huán)丙沙星均以13.1％的耐藥率低于其他三代頭孢菌素，表現(xiàn)出較好的抗菌活性，頭孢吡肟的耐藥率與MYSTIC的報(bào)告基本相同。
值得注意的是β－內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合藥物可抑制細(xì)菌產(chǎn)生質(zhì)粒介導(dǎo)的廣譜β－內(nèi)酰胺酶，使因產(chǎn)酶而致耐藥的菌株
轉(zhuǎn)為敏感，其抗菌作用顯著優(yōu)于單成分，如哌拉西林/他唑巴坦使銅綠假單胞菌對哌拉西林的耐藥率從17.8％降至6.5％。同時(shí)表3顯示哌拉西林耐藥率有下降趨勢，2001～2003年分別為22.2％，17.1％，15.6％，3年下降6.6％，原因有待研究。
在12種抗菌藥物中三代頭孢菌素的耐藥率，中介率呈逐年增長，引起我們的關(guān)注。其中107株銅綠假單胞菌對頭孢曲松鈉耐藥率63.6％，頭孢噻肟鈉耐藥率雖然為38.3％，但其中介率高達(dá)48.6％，如表3所示，銅綠假單胞菌對頭孢噻肟鈉的耐藥率從2001年33.3％升至2003年的44.4％，同期對頭孢曲松鈉的耐藥率從48.1％升至68.9％，升幅達(dá)11.1％，20.8％，高于國家細(xì)菌耐藥監(jiān)測研究組（BRSSG）2001年、2002年的結(jié)果，這不僅與細(xì)菌本身的生物學(xué)特征有關(guān)，還可能與三代頭孢菌素在我院臨床的廣泛應(yīng)用密切相關(guān)，有必要加強(qiáng)對銅綠假單胞菌耐藥率有計(jì)劃的連續(xù)監(jiān)測。
雖然根據(jù)實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)結(jié)果用藥與臨床實(shí)際感染控制情況有一定差異，但比經(jīng)驗(yàn)用藥針對性強(qiáng)效果好［6］。為提高療效、減少藥物不良反應(yīng)、減少耐藥菌株的產(chǎn)生、延長抗生素使用壽命和合理使用抗生素，臨床醫(yī)生應(yīng)按規(guī)范積極送檢感染標(biāo)本。同時(shí)，加強(qiáng)藥敏監(jiān)測可以彌補(bǔ)由于細(xì)菌報(bào)告不能及時(shí)獲得的缺陷，在長期的耐藥監(jiān)測數(shù)據(jù)中出本院及院內(nèi)各病區(qū)主要致病菌的耐藥規(guī)律，制定合理的治療方案，對降低細(xì)菌耐藥率、有效控制醫(yī)院感染具有重要意義。
【參考文獻(xiàn)】
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